Отзывы шелковое окрашивание chi: Краска для волос CHI Стойкий безаммиачный краситель

Есть несколько преимуществ использования Biosilk Silk Therapy. Во-первых, придает волосам ощущение шелка, а это значит, что они будут гладкими и красивыми. Он кремовый, поэтому капля может иметь большое значение.

Это гарантирует долгий срок службы. Как и Chi Silk Infusion, он может помочь вам контролировать завивание волос.Поскольку он подходит для всех типов волос, вы можете использовать его на сухих, жирных и даже чувствительных волосах.

Также поможет укладывать волосы и сделает их гладкими и мягкими. Это дорогая, но эффективная сыворотка.

Есть недостатки?

Biosilk Silk Therapy содержит силикон, который может постепенно повредить волосы.

Также стоит отметить:

Бутылка довольно маленькая. Следовательно, он может быстрее истощиться. Это и тот факт, что это дорого, возможно, это не лучший вариант для вас, если вы ищете лучшее предложение.

Он также может сделать ваши волосы жирными, особенно если у вас жирные волосы. Кажется, что некоторым пользователям нравится запах, но многие из них заявили, что им не нравится запах.

CHI Silk Infusion

Если вы ищете большие объем, цвет и текстуру для своих волос, вы, вероятно, попробуете любой продукт, который, как утверждается, обеспечивает это. Является ли Chi Silk Infusion одним из этих продуктов? Давайте узнаем в этом небольшом обзоре.

Что такое Chi Silk Infusion?

CHI Silk Infusion — одно из популярных средств для ухода за волосами.Эта несмываемая восстанавливающая процедура не только придает блеск вашим волосам. Но это также гарантирует, что ваши волосы сохранят влагу.

В результате волосы становятся мягкими, послушными и блестящими. Кроме того, он легко ложится на волосы и подходит для всех типов волос. Независимо от того, есть ли у вас волнистые, жесткие, тонкие или тяжелые волосы, это должно сработать для ваших волос.

Продукт обогащен соевым белком, шелком и пшеницей. Это сделает ваши волосы более сильными, свежими и мягкими.

Кто может им пользоваться?

Поскольку Silk Infusion подходит для всех типов волос, вы можете использовать его как для химически обработанных, так и для натуральных волос.Это означает, что текстура ваших волос или текущее состояние не будут иметь большого значения.

У большинства людей все еще будут натуральные волосы.

Если вы среди них, то вам не о чем беспокоиться. Если у вас чувствительные волосы или вы обработали их, вы можете столкнуться с некоторыми недостатками, хотя ни один продукт не свободен от нескольких недостатков.

Какие преимущества?

Еще одним преимуществом использования этого продукта является то, что он не содержит спирта. Некоторые люди могут подумать, что им нужно только избегать употребления алкоголя в пище или в том, что они наносят на кожу.

Другое примечание:

Это может привести к повреждению не только этих двух, поэтому продукт, не имеющий его, является хорошим.

Еще одно преимущество — не оставляет следов на волосах. В этом виновато множество косметических товаров, поэтому наличие другого товара — отличное дополнение.

Есть недостатки?

Как и другие средства для ухода за волосами, это средство не лишено недостатков. Одна из них — цена, которая немного завышена. Однако, если вы можете заплатить цену, некоторые пользователи утверждали, что продукт работает.

Для сравнения, он не такой дорогой, как Biosilk, который стоит почти 20 долларов.

Также:

На рынке много подделок. Вам нужно быть осторожным и убедиться, что вы покупаете товары у уважаемого бренда, такого как Amazon.

Некоторые люди также жалуются, что он имеет сильный аромат. Итак, если у вас чувствительный нос, вы можете выбрать что-нибудь с приятным запахом.

Окончательный вердикт по выбору Chi Silk или Biosilk

Если вы рассматриваете Chi Silk Infusion или Biosilk, выбор должен быть простым. Если вам нужен хорошо зарекомендовавший себя продукт, который многие считают надежным, выбирайте Biosilk.

Однако это дорого. С другой стороны, если вам нужно доступное средство для ухода за волосами с аналогичными функциями, выбирайте Chi Silk Infusion.Учтите, что это может быть не так эффективно.

Также читайте:

Мы зарабатываем комиссионные, если вы покупаете по нашей ссылке. Большинство продуктов не тестируются владельцем сайта (за исключением некоторых). Контент основан на исследованиях и отзывах пользователей.

Совместное использование — это забота!

Наночастицы фиброина шелка, окрашивающие индоцианин в зеленый цвет для фототермической терапии глиобластомы под визуализацией

Abstract

Шелк легко окрашивался в традиционной текстильной промышленности из-за его сильного сродства со многими красителями.При этом биосовместимый фиброин шелка был впервые экстрагирован из коконов тутового шелкопряда Bombyx mori . Наночастицы SF (SFNP) были приготовлены для окрашивания индоцианиновым зеленым (ICG) и создания терапевтической наноплатформы (ICG-SFNP) для фототермической терапии глиобластомы. ICG легко инкапсулировался в SFNP с очень высокой эффективностью инкапсуляции, достигающей 97,7 ± 1,1%. ICG-SFNP проявляли сферическую морфологию со средним размером частиц 209,4 ± 1,4 нм и отрицательным дзета-потенциалом -31.9 мВ, демонстрируя хорошую стабильность в физиологической среде. Более того, ICG-SFNP показали профиль медленного высвобождения ICG in vitro , и только 24,51 ± 2,27% инкапсулированного ICG высвободилось даже через 72 часа. Между тем, ICG-SFNP проявляли более стабильный фототермический эффект, чем свободный ICG после воздействия ближнего инфракрасного излучения. Температура ICG-SFNP быстро повышалась на 33,9 ° C в течение 10 мин и поддерживалась в течение более длительного времени. ICG-SFNP также легко интернализовались с опухолевыми клетками C ₆ in vitro , и для визуализации клеток наблюдалась сильная красная флуоресценция ICG в цитоплазме. In vivo визуализация показала, что ICG-SFNP эффективно накапливались внутри опухолевого участка у мышей C ₆ , несущих глиому Xenograft nude, посредством инъекции в вену. Более того, температура опухолевого участка быстро повышалась, чтобы убить опухолевые клетки после местного NIR-облучения. После лечения его рост был полностью подавлен с относительным объемом опухоли 0,55 ± 033, в то время как свободный ICG составлял 33,72 ± 1,90. В целом, ICG-SFNP могут быть эффективным терапевтическим средством для интраоперационной фототерапии и визуализации.

Ключевые слова: Фиброин шелка, наночастицы, индоцианиновый зеленый, фототерапия, глиобластома

1. Введение

Глиобластома, особенно мультиформная глиобластома (ГБМ), далеко не испорчена человечеством. ГБМ была классифицирована Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) как IV степень, которая относится к наиболее серьезным типам глиомы (Bush et al., 2017). Показатель для пациентов со злокачественными глиомами достиг 3,19 случая на 100000 в год, что составило 45,2% от общего количества злокачественных новообразований центральной системы, и люди, получившие хирургическое лечение, наконец разочаровались высокими показателями рецидивов и смертности в течение двух лет из-за инвазивного роста злокачественной опухоли. и нечеткое определение границы опухоли против нормальных клеток (Bush et al., 2017; Wang et al., 2017). Текущие стратегии лечения с помощью GBM предполагают более точное позиционирование с выборочным различением границ опухоли и более тщательное лечение в сочетании с несколькими лекарствами или клиническими методами, такими как ультразвук (Lin et al., 2016), свет (Guan et al., 2017), тепловые (Feng et al., 2015), магнитные (Xu et al., 2016).

Фототерапия, представленная фотодинамической терапией (ФДТ) и фототермической терапией, является неинвазивным и эффективным методом лечения рака.При фототерапии свет вводится, поглощается фотосенсибилизатором (ФС) или фототермическим агентом и превращается в активные формы кислорода (АФК) или локальную гипертермию, что приводит к гибели опухолевых клеток. Важны избирательное и эффективное уничтожение целевых раковых клеток при сохранении нормальной ткани, достаточное увеличение накопления фототерапевтического агента в опухоли, точная фокусировка лазерного луча на области опухоли и адекватное преобразование поглощенной световой энергии в ROS или тепло. Флуоресцентное изображение (FL) в окне ближнего инфракрасного (NIR) (NIR) (650–900 нм) многообещающе из-за минимальной автофлуоресценции и тканевого рассеяния (Pansare et al., 2012). Для исследований использовались многие NIR-красители, такие как cy5.5 (Veiseh et al., 2007), IR-780 (Ye et al., 2017) и индоцианин зеленый (ICG) (Mundra et al., 2015; Sahu et al. ., 2016; Yan et al., 2016) для визуализации и фототерапии опухолей. Например, ICG может не только в реальном времени обнаруживать опухоль и ее границы с нормальной тканью, используя усиление контраста и технологию разрешения спектра, но также может поглощать ближний инфракрасный свет и оказывать локальное тепловое воздействие на опухоль (Ma et al., 2013; Чжао и др., 2014; Безьер и др., 2015). Однако низкая стабильность и короткие периоды полураспада в крови ограничивают его широкое клиническое применение. Например, ICG склонен к агрегации и разложению в водном растворе, что приводит к его быстрому выведению из печени (Pansare et al., 2012).

Недавно для системной терапии ФДТ были разработаны различные системы доставки, такие как липосомы, дендримеры и наночастицы (НЧ). Системная доставка НЧ, конъюгированных с лекарственными средствами, может улучшить биодоступность, стабильность, период полувыведения и выведение лекарств из организма.Для приготовления систем доставки лекарств на основе НЧ можно использовать различные биоматериалы, как натуральные, так и синтетические. Наночастица поли (лактид-гликолид) (PLGA), которая была модифицирована нацеленным на мозг пептидом, ангиопепом-2, была подготовлена ​​для загрузки ICG вместе с доцетакселом (DTX) для химио- и фототерапии глиомы под воздействием ближнего инфракрасного излучения. (Hao et al., 2015). В последние годы НЧ на основе природных белков были больше заинтересованы в биомедицинских областях из-за их подходящей биосовместимости, биоразлагаемости, меньшей иммуногенности и способности хорошо переноситься с биологическими системами.Например, сывороточный альбумин человека был семейством глобулярных и водорастворимых белков с низкой иммуногенностью и отсутствием токсичности. Наночастицы человеческого сывороточного альбумина (HSA) -ICG (HSA-ICG NP) были приготовлены с помощью межмолекулярных дисульфидных конъюгаций для синергетической фототерапии рака под контролем двойного режима визуализации (Sheng et al., 2014). НЧ HSA-ICG имели высокое накопление с отношением опухоли к нормальной ткани 36,12 ± 5,12 через 24 часа и долгосрочное удерживание более семи дней у мышей с опухолью 4T1.

С другой стороны, фиброин шелка (SF) представляет собой природный белок, который обычно получают из коконов тутового шелкопряда Bombyx mori , которые веками использовались в текстильной промышленности.SF обладает большой молекулярной массой 200–350 кДа или более и объемными, повторяющимися, модульными гидрофобными доменами GAGAGS, которые прерываются небольшими гидрофильными группами. Помимо первичной структуры, вторичная организация SF доминирует над его желатиновыми свойствами. SF обладает множеством превосходных свойств, включая высокую механическую прочность, гибкий процесс приготовления, биосовместимость и биодеградацию для тканевой инженерии. SF использовался во множестве биомедицинских приложений и в разных форматах; в частности, он широко использовался в качестве медицинских швов, для инженерии костной и хрящевой ткани или в последнее время в клинических испытаниях для реконструкции барабанной перепонки и грудных имплантатов.Хотя этот биоматериал широко используется для местного применения в клинических или доклинических режимах, о некоторых из них сообщалось для внутривенного введения (Mottaghitalab et al., 2015). Недавно SF был получен обычным методом высаливания и использовался в качестве материалов для изготовления наночастиц для внутривенной доставки доксорубицина, демонстрируя некоторое превосходство, такое как хорошая биосовместимость и увеличенное время циркуляции, по сравнению с липосомами, содержащими ПЭГ. Наночастицы SF были приготовлены для захвата доксорубицина для нацеливания на опухоль MCF-7 / ADR с помощью внешнего магнита (Tian et al., 2014). Результаты показали, что наночастицы SF могут продлевать время циркуляции доксорубицина в крови и повышать эффективную противоопухолевую активность.

Фиброин шелка легко окрашивался в традиционной текстильной промышленности Китая из-за его сильного сродства со многими красителями. Боковые цепи аминокислотных остатков SF могут взаимодействовать с пигментами. Например, краситель феноловый красный легко улавливался в β-листовых структурах сушильных шелковых пленок для определения pH in vitro в культуре клеток .Кроме того, такие пигменты, как хлорофил-α, β-каротин и астаксантин, адсорбированные на SF, более устойчивы к видимому и УФ-свету, чем пигменты без фиброина, которые быстро обесцвечиваются под действием УФ-излучения. Кроме того, типичный флуоресцентный краситель родамин B использовался для кормления шелкопряда и образования димеров в организме, которые легко абсорбировались SF in vivo для отслеживания ксенобиотиков в железе тутового шелкопряда. Это интересное явление указывает на тесное взаимодействие SF и некоторых природных красителей (Tansil et al., 2011).

Приготовление наночастиц SF (SFNP) в основном основано на эффекте высаливания, как описано ранее в литературе. Обычно этим методом было трудно получить SFNP с одинаковым размером. Более того, полученные наночастицы были склонны к агрегированию в недиспергируемые кластеры в процессе высаливания. Кроме того, наночастицы SF имеют тенденцию к агрегированию в биологической среде, такой как физиологический раствор или PBS (10 мМ, pH = 7,3), что препятствует нанесению наночастиц in vivo .Обычно требуется, чтобы SFNP были покрыты положительно заряженным веществом, таким как полиэтиленимин (Wang et al., 2015), хитозан (Wang et al., 2015; Collado-González et al., 2016) или доксорубицин (Seib et al., 2015). др., 2013) для повышения их устойчивости в среднем растворе. Однако катионные покрывающие агенты обычно были токсичными для живого организма, что приводило к тупиковой ситуации при внутривенном введении наночастиц SF.

В этом исследовании SF без иммуногенности впервые был извлечен из B.mori шелкопряда коконы и SFNP получали методом осаждения ацетоном. Для получения стабильного SFNP приготовление наночастиц SF было тщательно исследовано путем контроля концентрации раствора SF. ICG инкапсулировали в SFNP для визуализации и фототерапии глиобластомы (как показано на рисунке). Между тем, физико-химические свойства ICG-SFNP, включая размер частиц, дзета-потенциал, морфологию и фототермический эффект, также были тщательно охарактеризованы in vitro .Во-вторых, захват клетками in vitro и фотоиндуцированная цитотоксичность ICG-SFNP также были тщательно изучены с использованием линии клеток ₆ in vitro . Наконец, in vivo, распределение ICG-SFNP у C ₆ голых мышей с ксенотрансплантатом, несущих глиому, выполняли с помощью визуализации in vivo после внутривенной инъекции. Между тем фототермический эффект ICG-SFNP на опухолевую ткань исследовали с помощью тепловизора и датчика температуры, а также отслеживали ингибирование роста опухоли после внутривенного введения ICG-SFNP с последующим лазерным облучением при 808 нм в ближнем ИК-диапазоне.Наконец, уплотнение опухоли после лечения было обнаружено с помощью ультразвуковой эластографии сдвиговой волной (SWE).

Схематический дизайн ICG-SFNP и их потенциальное клиническое применение для визуализации и фототерапии глиобластомы.

2. Материалы и методы

2.1. Материалы

Bombyx mori Коконы были собраны на фабрике по открытию шелкового хлопка Чжэцзян-хучжоу, Шуанлинь-хуацзе. Na ₂ CO ₃ и бромид лития были приобретены у Sigma-Aldrich Company (Сент-Луис, Миссури, США).Фосфорновольфрамовая кислота и ICG были получены от Meilunbio ^® (Dianlian, Китай). Мешок для диализа (3500 Да) был предоставлен Solarbio ^® (Пекин, Китай). Среда Игла, модифицированная Дульбекко (DMEM), и фетальная телячья сыворотка, и трипсин были предоставлены Gibco BRL ^® (Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США). Клеточная линия C ₆ была получена из Института биохимии и клеточной биологии Шанхайского института биологических наук Китайской академии наук (Шанхай, Китай).Набор для подсчета клеток-8 (CCK-8) был приобретен в Додзиндо (Минато-ку, Япония).

2.2. Экстракция раствора SF

Раствор фиброина шелка готовили, как описано ранее (Kim et al., 2016). Вкратце, коконы B. mori разрезали на кусочки и погружали в раствор Na ₂ CO ₃ (0,02 М). Для удаления серицина раствор нагревали и кипятили 1 ч при 100 ° C. После этого вареные коконы вынимали и промывали дистиллированной водой.После окрашивания очищенные от слизи волокна (10 г) медленно растворяли в 200 мл раствора LiBr (9,3 М) при 60 ° C в течение 3 часов. Затем флокулянтный осадок удаляли центрифугированием при 5000 об / мин, а супернатант дополнительно фильтровали для удаления крошечного нерастворенного вещества. Наконец, растворенный раствор шелка подвергали диализу с помощью диализного мешка (MWCO 3500) против 2000 мл деионизированной воды в течение 3 дней для удаления LiBr с получением разбавленного раствора SF. Концентрация полученного разбавленного раствора SF составляла приблизительно 2 мас.%, Что было рассчитано путем взвешивания остаточного сухого SF после окрашивания 10 мл раствора SF вентилятором.Разбавленный раствор SF дополнительно концентрировали в вакуумном сушильном шкафу при 65 ° C, и в итоге получали 4% раствор SF. Концентрированный раствор SF хранили в холодильнике при 4 ° C для дальнейшего использования. Во время процесса удаления слизи оставшийся серицин на поверхности шелкового волокна контролировали с помощью сканирующего электронного микроскопа (H-7500, Hitachi, Япония). Наконец, молекулярную массу экстрагированного SF анализировали с помощью SDS-PAGE.

2.3. Приготовление и характеристика SFNP и окрашенных ICG наночастиц SF (ICG-SFNP)

Наночастицы SF были приготовлены, как описано ранее (Hassani et al., 2017) с некоторыми изменениями. Вкратце, чтобы вызвать процесс десольватации, раствор SF (9 мл) добавляли по каплям (50 мкл / капля) к ацетону при интенсивном перемешивании при комнатной температуре. После добавления раствора SF реакционный раствор приобрел молочно-белый цвет, и полученный раствор дополнительно перемешивали в течение ночи, так что наночастицы SF полностью обезвоживались. Затем полученный раствор SFNP дополнительно вращали для удаления ацетона, а оставшиеся SFNP окончательно восстанавливали в дистиллированной воде с последующей обработкой ультразвуком при амплитуде 300 Вт в течение 20 минут (импульс 1 с ВКЛ и 2 с ВЫКЛ).После этого SFNP фильтровали через фильтрующую мембрану (JinTeng, Tianjin, China) с размером 0,45 мкм для удаления загрязнений. Отфильтрованную суспензию наночастиц хранили при 4 ° C для дальнейшего использования. Для скрининга стабильных SFNP использовали раствор SF с различной концентрацией для подготовки серии SFNP для исследования стабильности. Для окрашенных ICG SFNP сначала добавляли 1 мл раствора ICG (1 мг / мл) к раствору SF (9 мл) с последующей процедурой, аналогичной получению SFNP. Только что конечный водный раствор ICG-SFNPs был дополнительно добавлен в устройство для ультрафильтрации (Millipore, Billerica, MA, USA) для удаления неокрашенного ICG.

После удаления неокрашенного ICG, ICG-SFNPs были разрушены добавлением 10% додецилсульфата натрия (SDS) для высвобождения окрашенного ICG в наночастицы (Mundra et al., 2015). Концентрацию ICG определяли спектрометром UV-Vis при 785 нм. Эффективность инкапсуляции (EE%) и способность загрузки лекарственного средства (DL%) ICG-SFNP рассчитывалась по следующей формуле: EE (%) = (вес окрашенного ICG) / (вес теоретического ICG в рецептура) × 100%; DL (%) = (вес окрашенного ICG) / (общий вес НЧ) × 100%.

2.4. Характеристика SFNP и ICG-SFNP

Гидравлический диаметр ( D _h ), индекс полидисперсности (PDI) и дзета-потенциал SFNP или ICG-SFNP были обнаружены Zetasizer Nano ZS (Малверн, Великобритания). Морфологию этих наночастиц также оценивали с помощью просвечивающей электронной микроскопии (JEOLJEM-2000EX, JEOL, Япония) при 200 кВ. Вкратце, 10 мкл раствора наночастиц наносили по каплям на покрытую углеродом сетку с последующим окрашиванием 2% фосфорновольфрамовой кислотой.

Инфракрасные спектры с преобразованием Фурье (FT-IR) лиофилизированного порошка SF, SFNP и ICG-SFNP анализировали на спектрофотометре FT-IR 8400 (Shimadu, Япония) с использованием диска бромида калия. Кристалличность SFNP анализировали методом порошковой дифракции рентгеновских лучей (XRD) (Rigaku RINT 2000; Rigaku Co., Токио, Япония) с использованием излучения CuΚα с областью сканирования 10–50 °. Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) была проведена на SFNP для изучения их тепловых характеристик. Термическое изменение порошка SFNPs анализировали с помощью дифференциального сканирующего калориметра (METTLER TOLEDO DSC822e, Цюрих, Швейцария).SFNP сканировали при комнатной температуре и нагревали до 400 ° C со скоростью 20 ° C / мин.

2,5. Спектральные свойства ICG-SFNP

Спектр UV – Vis (TU-1901, Пекин) свободного раствора ICG (20 мкг / мл) был впервые обнаружен спектрометром UV / Vis в диапазоне от 400 до 850 нм. Чтобы подтвердить успешную инкапсуляцию ICG, также был обнаружен УФ-видимый спектр ICG-SFNP. Между тем, к ICG-SFNP добавляли 10% SDS и инкубировали в течение 15 минут для разрушения его наночастиц и высвобождения ICG.Также был записан спектр выпущенных ICG.

Спектральную стабильность ICG-SFNP измеряли с помощью УФ / видимого спектрометра. Вкратце, ICG-SFNP добавляли к PBS с pH 7,4 (10 мМ, 150 мМ NaCl) и дополнительно инкубировали при 37 ° C в течение разного времени (эквивалентная концентрация ICG в ICG-SFNP составляла 20 мкг / мл). Спектры ICG-SFNP регистрировали в УФ-видимой области.

2.6. Фототермический эффект ICG-SFNP

Чтобы измерить фототермический эффект ICG-SFNP, 2 мл ICG-SFNP (соответствующая концентрация ICG: 100 мкг / мл) было добавлено в кварцевую кривую ( Xinli, Jiangsu), и датчик температуры контактировал с раствором.При использовании лазера ² мощностью 1 Вт / см для облучения образца в течение 40 мин, соответственно, изменения температуры каждого образца регистрировались датчиком температуры (мини-регистратор данных температуры RC-4; Elitech, Цзянсу, Китай) каждые 0,5 мин. Тепловизионное изображение в реальном времени регистрировалось тепловизором (DT-9868, CEM). PBS и свободный ICG также измеряли в качестве контроля.

Чтобы измерить стабильность фототермического круга ICG-SFNP, изменение температуры ICG-SFNP измеряли путем включения / выключения света (5 мин / 15 мин) три раза.Температуру регистрировали каждые 0,5 мин с помощью датчика температуры.

2.7.

In vitro профиль высвобождения ICG из ICG-SFNP изучали методом динамического диализа, как описано ранее в литературе (Tansil et al., 2011). Вкратце, ICG-SFNP (1 мл) добавляли в мешки для диализа, а затем мешки для диализа погружали в 9 мл pH7,4PBS, содержащего 0,5% твин-80, при непрерывном встряхивании при 120 об / мин при 37 ° C.В другой интервал времени отбирали аликвоты супернатанта и измеряли концентрацию ICG с помощью УФ / видимого спектрометра, как описано выше.

2,8.

2.8.1. Культура клеток

C ₆ клеток глиомы культивировали в культуральной среде DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, 1% пенициллин и 1% стрептомицин, при 37 ° C в условиях, содержащих 5% CO ₂ .

2.8.2.

C ₆ клеток высевали в покрытые шестью лунками покровные стекла с плотностью 5 × 10 ⁴ в 1 мл культуральной среды.После 24 часов культивирования при 37 ° C в условиях, содержащих 5% CO ₂ , среду заменяли новой средой с ICG-SFNP или свободным ICG (30 мкг / мл ICG). После 1, 4, 8 ч инкубации клетки трижды промывали PBS (0,01 M, pH = 7,4), фиксировали 4% параформальдегидом и, наконец, клетки анализировали под конфокальной лазерной микроскопией.

2.8.3.

Посеянные клетки C ₆ (5 × 10 ³ / лунка) в 96-луночный в 100 мкл среды.Планшеты выдерживали при 37 ° C в течение 24 ч, чтобы клетки прилипали ко дну стенок. Затем среду заменяли новой средой, содержащей ICG-SFNP и свободный ICG. После инкубации в течение 4 ч клетки промывали PBS и инкубировали со средой. Каждую лунку облучали ближним инфракрасным светом (1 Вт / см ² , 808 нм) в течение 3 минут отдельно. Клетки инкубировали в течение 2 часов в условиях CO ₂ , и жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа CCK-8.

2.9.

2.9.1. Голые мыши Glioma BalB / C модель

Голые мыши-самцы BalB / C (от шести до восьми недель) были приобретены в Шанхае, Китай. Все эксперименты на животных проводились с одобрения и под руководством Институционального комитета по уходу и использованию животных Медицинского университета Вэньчжоу (уровень SPF). Вкратце, клетки C ₆ с плотностью 1 × 10 ⁷ вводили подкожно в правые бока каждой мыши.

2.9.2.

Ультразвуковая эластография сдвиговой волной (SWE) Изображения были получены с помощью ультразвукового устройства Aixplorer (SuperSonic Imagine; Экс-ан-Прованс, Франция) с использованием поверхностного зонда 15 МГц, предназначенного для исследований (256 элементы, шаг 0,125 мкм). Когда опухоль достигла 100 мм ³ , мышей вдыхали 5% газообразным изофлураном и температуру их тела поддерживали на физиологическом уровне с помощью нагревательной пластины. Мышам внутривенно вводили PBS, свободный ICG, ICG-SFNP, и участок опухоли был обращен вверх.Перед измерением опухоли были покрыты слоем стандартного ультразвукового геля. Снимки SWE-сканирования участка опухоли были получены до и после 5-минутного облучения.

Когда опухоль достигла 100 мм ³ , мышам, несущим опухоль, инъецировали ICG-SFNP (200 мкг / мл ICG). Облучение лазером в ближнем инфракрасном диапазоне с длиной волны 808 нм (1 Вт / см ² ) применяли к месту опухоли на 5 мин. Размеры опухоли измеряли штангенциркулем каждый день и рассчитывали как объем опухоли = (длина опухоли) × (ширина опухоли) ² /2.Относительные объемы опухоли были рассчитаны как V / V ₀ ( V ₀ — объем опухоли на момент начала лечения). Вес тела мышей измеряли через день в течение двух недель. Тепловидение проводилось с помощью тепловизора в ближнем инфракрасном диапазоне до и после облучения.

2.10.

Когда опухоль достигла 100 мм ³ , изображения in vivo FL были получены с помощью IVIS (IVIS ^® Lumina II) после внутривенного введения ICG-SFNP и свободного ICG (оба 200 мкг / мл).Набор фильтров (фильтр возбуждения: 710 нм. Эмиссионный фильтр: ICG) использовали для обнаружения ICG. Через 12 ч крыс с опухолью умерщвляли. Основные органы (сердце, печень, селезенка, легкие и почки) и опухоли собирали для определения распределения ICG-SFNP и свободного ICG ex vivo .

2.11. Системная токсичность

После умерщвления мышей собирали образцы ткани сердца, печени, селезенки, легких и почек и обычно окрашивали гематоксилином и эозином (H&E).

2.12. Статистический анализ

Уровень значимости во всех статистических анализах был установлен на уровне вероятности p <0,05. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. Для анализа данных использовались дисперсионный анализ и t-тесты.

3. Результаты и обсуждения

3.1. Приготовление и характеризация пустых SFNP / ICG-SFNP

3.1.1. Приготовление холостых SFNP / ICG-SFNP

В этой работе SFNP получали путем самосборки цепи SF, индуцированной органическим растворителем.Нековалентные взаимодействия (например, водородные связи, гидрофобный эффект) в цепи SF в растворе уменьшаются, а дисульфидные связи альбумина расщепляются, что приводит к разворачиванию белка в линейную структуру, такую ​​как случайный клубок / спираль. После добавления органических растворителей, таких как этанол, ДМСО или ацетон, конформация цепи SF перешла от случайной спирали / спирали к структурам β-пластин, которые доминировали в самосборке SF в наночастицы. Этот метод устраняет необходимость в сшивающих агентах и ​​потреблении энергии (например,грамм. процесс эмульгирования путем гомогенизации под высоким давлением), который обычно использовался для получения наночастиц на основе белка.

Серии SFNP были приготовлены путем изменения концентрации SF во время самосборки. Их D _h и PDI были обнаружены DLS, и результаты показаны на рисунке S2A. Размер наночастиц и полидисперсность SFNP обычно варьировались в зависимости от концентрации SF. По мере увеличения концентрации SF с 0,5% до 2% значение D _h SFNP постепенно увеличивалось со 121.От 87 ± 3,57 нм до 237,8 ± 25,6 нм, тогда как PDI соответственно снизился с 0,838 ± 0,11 до 0,431 ± 0,02. Интересно, что когда концентрация SF достигала 4%, D _h SFNP составляли 193,3 ± 5,43 нм, а распределение частиц было очень узким с PDI 0,103 ± 0,02. И наоборот, когда концентрация SF дополнительно увеличилась до 8%, D _h и PDI SFNP снова увеличились до 352,3 ± 44,61 нм и 0,453 ± 0,01 соответственно. Зависимость от концентрации SF D _h и PDI для SFNP может быть объяснена разной стабильностью этих наночастиц.В предыдущем отчете SFNP были нестабильными после диспергирования в PBS, DMEM или других биологических средах. Отдельные наночастицы были подвержены агрегированию или разложению в этих средах, что приводило к быстрому увеличению размера их частиц и более широкому распределению частиц по размерам (Wang et al., 2015). Стабильность этих SFNP в PBS с pH 7,4 (10 мМ, 150 мМ NaCl) контролировали с помощью DLS в различный временной интервал, и результаты представлены на рисунке S2B. Действительно, размер частиц SFNP, полученных с использованием 0.5% или 1% SF быстро увеличивалось после добавления SFNP в раствор PBS. Только за 5 мин размер частиц увеличился до 1437,17 ± 405,55 нм и 1525 ± 181,81 нм для этих двух типов соответственно. Когда концентрация SF увеличилась до 2%, стабильность SFNP несколько улучшилась. После 5 мин инкубации в PBS размер частиц SFNP увеличился до 662,83 ± 48,84 и постепенно со временем агрегировался. Напротив, что касается 4% SF, SFNP все еще оставались стабильными, D _h , поддерживаясь на уровне ок.200 нм за все время тестирования. Однако SFNP, приготовленные из 8% раствора SF, агрегированного в PBS, D _h увеличиваются с 321,1 ± 2,84 нм до 2596,33 ± 230,48 нм после 120 мин инкубации. В качестве альтернативы эффект Тиндаля SFNP в растворе PBS также регистрировался в реальном времени цифровой камерой после обычного красного лазерного излучения (Рисунок S3). В соответствии с тенденциями изменения размера частиц SF-NP, агрегированные частицы SFNP с помощью раствора SF 0,5%, 1% или 8% можно было наблюдать невооруженным глазом.Для SFNP, приготовленных на 2% или 4%, светорассеяние вдоль светового пути было сильным и однородным без каких-либо видимых агрегатов. Но время реакции в ацетоне имеет важное влияние на стабильность SFNP, приготовленных из 2% раствора SF в PBS.

Формирование и стабильность SFNP были тесно связаны с переходом вторичной конфигурации SF, как показано на рисунке S2C. При воздействии СФ в ацетон вторичная структура блока ГАГАГС в молекуле СФ сразу же изменилась с α-спирали на β-лист, образуя гидрофобный сегмент.Гидрофобные цепи из внутри / между молекулами сначала дегидратировались и образовывали гидрофобное ядро, в то время как гидрофильный блок между цепями GAGAGS спонтанно агрегировался с образованием внешней оболочки SFNP. SFNP, приготовленные с низкой концентрацией SF (0,5%, 1% и 2%), имели тенденцию всплывать из-за рыхлой агрегации между цепями GAGAGS, в то время как SFNP с высокой концентрацией SF (8%) проявляли тенденцию к осаждению из-за его высокой концентрации. плотность SF внутри наночастицы. Только SFNP, приготовленные с использованием 4% SF, были стабильными в PBS, который имеет подходящий размер частиц и полидисперсность.

3.1.2. Морфология и размер частиц пустых SFNP / ICG-SFNP

Морфологию SF-NP и ICG-SFNP наблюдали с помощью ПЭМ. ПЭМ-графики SF-NP и ICG-SFNP, полученных путем контроля концентрации SF на уровне 4%, были показаны на. Частицы сферической формы диаметром ок. 220 нм был виден независимо от того, инкапсулирует ICG или нет на этих графиках, что указывает на то, что инкапсуляция ICG не нарушает самосборку цепи SF. Более того, динамический диаметр и распределение размеров SFNP и ICG-SFNP также измерялись с помощью DLS.Как показано на фиг., D _h и PDI SFNP составляли 198,9 нм и 0,1, в то время как D _h ICG-SFNP немного увеличивалось до 209,4 нм, а PDI снижалось до 0,04. Между тем, было обнаружено, что поверхностный дзета-потенциал SFNP и ICG-SFNP составляет -35,6 и -31,9, соответственно, что способствует стабильности этих SFNP в растворе. Эффективность инкапсулирования ICG в SFNP достигала 97,7 ± 1,1%, что указывает на сильное сродство материалов SF к красителю ICG.

ПЭМ-изображения и распределение частиц по размерам SFNP (A, C) и ICG-SFNP (B, D).

3.1.3. Переход вторичной структуры SF в пустых SFNP / ICG-SFNP

Чтобы подтвердить, перешла ли вторичная структура SF из α-спирали или случайной спирали в β-лист в наночастицах, лиофилизированный порошок SFNP / ICG-SFNP был исследован FT-IR, XRD и DSC. Как показано на фиг.1, пики при 1654,3 см ^-1 и 1541,8 см ^-1 , приписываемые полосе амида I и полосы амида II для экстрагированного раствора SF, сдвинуты на 1645,5 см ^-1 и 1521 см ^-1 для SFNP соответственно.Эти результаты были вызваны переходом вторичной структуры SF от беспорядочной катушки к β-листу. Более того, переход не был нарушен инкапсуляцией ICG в SFNP, в которых произошел аналогичный сдвиг пиков. Аморфная дисперсия экстрагированного SF также переходила в кристаллическую форму в самоорганизованных SFNP, что было отражено в результатах XRD. Был только пик кристалла, за исключением слабого пика при 22,5 ° на рентгенограмме экстрагированного SF, что свидетельствует о неупорядоченном расположении молекулы SF.Напротив, группа пиков кристаллов при 15,4 °, 28,5 ° и 42,5 ° появилась на рентгенограмме лиофилизированных SFNP или ICG-SFNP (). Кристаллическая трансформация молекул SF дополнительно подтвердила переход вторичной конфигурации SF от α-спирали или случайного клубка к β-слою. Аналогичным образом, огромная разница в тепловом поведении извлеченного SF и SFNP также наблюдалась в результатах ДСК. Температура плавления при 275,1 ° C экстрагированного порошка SF была значительно ниже, чем у порошка SFNP (340.7 ° C) (), что свидетельствует о его низком кристаллическом или аморфном состоянии. Интересно, что в инкапсулированном ICG пик плавления SFNP появляется при более высокой температуре 353,3 ° C, что указывает на сильное взаимодействие между ICG и SFNP.

(A) FT-IR, (B) XRD и (C) DSC лиофилизированного порошка SF, SFNP, ICG-SFNP, (D) пиковое поглощение ICG в УФ-видимой области в различных составах, (E) In vitro стабильность ICG в различных препаратах после инкубации с pH7,4 PBS в течение разного времени при 37 ° C, и (F) фототермический эффект ICG-SFNP после воздействия лазерного света (808 нм NIR, 1 Вт / см ² ) в течение 40 минут, и (G) тепловизионное изображение различных препаратов, содержащих ICG, после 10 минут лазерного излучения, (H) фототермическая стабильность различных препаратов, содержащих ICG, и (I) in vitro профили высвобождения ICG из различных составов, содержащих ICG.

3.2. Спектральные свойства и фототермический эффект ICG-SFNP

Сначала был исследован УФ-видимый спектр ICG-SFNP, результаты которого представлены на рис. Холостые SFNP не показали пиков поглощения в диапазоне длин волн 500-800 нм. Для свободного раствора ICG наблюдались два характерных пика поглощения при 700 нм и 775 нм. Но один пик ICG сдвинулся с 700 нм до 726 нм, а другой пик при 775 нм исчез для ICG-SFNP, что указывает на инкапсуляцию ICG внутри SFNP вместо физического поглощения на его поверхности.Более того, когда детергент, SDS, был добавлен для разрушения структуры наночастиц ICG-SFNP и высвобождения инкапсулированного ICG (Li et al., 2017), снова появились два характерных пика поглощения ICG при 726 нм и 767 нм, что указывает на стабильную оптические свойства ICG-SFNP. Однако сообщалось, что свободный ICG в растворе был чувствителен к свойству гашения собственной флуоресценции (Manchanda et al., 2010). Таким образом, стабильность инкапсулирования ICG в SFNP дополнительно оценивали путем обнаружения инкапсулированного ICG на основании поглощения при 775 нм после добавления SDS.Как показано на фиг.4, инкапсулированный ICG был достаточно стабильным в течение двухнедельного теста, в то время как свободный раствор ICG быстро уменьшался.

Фототермический эффект ICG-SFNP также был оценен, и результаты показаны в. Влияние непрерывного NIR-излучения (1 Вт / см ² ) на температуру среды PBS было незначительным. Напротив, свободный раствор ICG после непрерывного воздействия NIR-излучения показал повышение температуры, а повышение температуры достигало 42 ° C после 10 минут облучения, при этом лучший противоопухолевый эффект обычно достигался для тепловой терапии в нескольких отчетах ( Zhao et al., 2014; Безьер и др., 2015). Фототермический эффект наблюдался также для ICG-SFNP при БИК-облучении. Более того, ICG-SFNP продемонстрировали сравнимую степень повышения температуры со свободным раствором ICG, но температура на стадии платформы для ICG-SFNP оставалась в течение более длительного времени при непрерывном NIR-облучении, в то время как температура платформы свободного раствора ICG постепенно снижалась после 20 мин. БИК-излучение (). Во время облучения в ближнем инфракрасном диапазоне тепловая картина всех групп также регистрировалась в режиме реального времени с помощью тепловизора, и результаты были показаны в.По сравнению со свободным раствором ICG, для ICG-SFNP также наблюдались более высокая температура и более длительное время выдержки. Фототермический эффект ICG-SFNP в режиме прерывистого облучения (ВКЛ = 10 мин, ВЫКЛ = 10 мин, три цикла) был дополнительно исследован, и были получены аналогичные результаты (). В целом, эти результаты предполагают, что инкапсуляция ICG в SFNP может предотвратить его взаимодействие с окружающей средой и замедлить его разложение, тем самым улучшив фототермический эффект ICG (Sheng et al., 2014).

3.3.

In vitro Профиль высвобождения лекарственного средства ICG из SFNP исследовали в PBS с pH 7,4, содержащем 0,5% Tween-80, при 37 ° C. Как показано на фиг.1, свободный ICG быстро диффундировал из диализного мешка в течение 24 часов, и процент высвобождения достигал высоты платформы, примерно 40% от общего ICG. Низкая высота платформы может быть связана с разложением свободного ИЦЗ в водном растворе, что было подтверждено результатами стабильности в.В контракте инкапсулированный ICG медленно высвобождался из SFNP без какой-либо платформы, и совокупный процент высвобождения составлял только 24,51 ± 2,27% от инкапсулированного ICG в течение 72 часов. Эти результаты свидетельствуют о хорошей стабильности инкапсулированных ICG в SFNP и сильном сродстве между ICG и SFNP для сохранения ICG (Salis et al., 2015). Поскольку между ICG и SF существует сильное физическое взаимодействие, был продемонстрирован профиль медленного высвобождения ICG из SFNP, что было очень полезно для них в нацеливании на опухолевую ткань посредством эффекта EPR (эффект улучшенного удерживания проницаемости).Фактически, фототермический эффект ICG не зависел от профиля высвобождения ICG из SFNP, и инкапсулированный ICG также проявлял стабильный фототермический эффект, как показано на. Для наночастиц ICG-SF было более выгодно стабилизировать ICG посредством простого физического взаимодействия по сравнению со стратегиями химического сшивания в большинстве ссылок (Nishi et al., 1995; Vandelli et al., 2001). Во-первых, самосборка SF вызывалась органическим растворителем для инкапсуляции ICG без добавления какого-либо химического сшивающего агента, как сообщается в литературе (Nishi et al., 1995). Во-вторых, структуру инкапсулированного ICG в SFNP было нелегко скомпрометировать, что было важно для них, чтобы практиковать фототермический эффект. Но наиболее распространенной стратегией химического сшивания было разрушение структуры ICG и нарушение ее физико-химических свойств.

3.4.

Поглощение клетками свободных ICG и ICG-SFNP клеточной линией C ₆ через 1, 4 и 8 ч инкубации наблюдали с помощью конфокальной микроскопии, и результаты были представлены в.Было показано зависящее от времени поглощение ICG-SFNP, в то время как не было значительного поглощения клетками свободного раствора ICG. После 4 часов инкубации очевидный красный ICG FL был локализован в цитоплазме клеток C ₆ , обработанных ICG-SFNP, и интенсивность FL стала более очевидной по мере увеличения времени до 8 часов. Но не было очевидного FL ICG в клетках C ₆ , обработанных свободным раствором ICG, даже при 8 ч инкубации. Повышенное клеточное поглощение ICG-SFNP может быть связано с эндоцитозом, специфичным для наночастиц, и повышением стабильности ICG, инкапсулированных в SFNP.

C ₆ Поглощение клетками и цитотоксичность ICG-SFNP: (A) изображения конфокальной микроскопии C ₆ после инкубации со свободным раствором ICG (30 мкг / мл) и ICG-SFNP (30 мкг / мл эквивалент ICG) и цитотоксичность холостых SFNP (B) и составов ICG (C) против линий клеток C ₆ в присутствии или в отсутствие облучения.

Цитотоксичность ICG-SFNP против клеток C ₆ дополнительно исследовали с помощью анализа CCK-8. Как показано на фиг.4, не наблюдалось какой-либо цитотоксичности SFNP, более 80% жизнеспособности клеток, независимо от наличия NIR-излучения или его отсутствия.Более того, также не было никакой токсичности двух составов ICG, включая свободный раствор ICG и ICG-SFNP, против клеток C ₆ в отсутствие NIR-излучения. Однако дозозависимая цитотоксичность для ICG-SFNP и свободного раствора ICG наблюдалась в присутствии NIR-излучения. Более того, цитотоксичность ICG-SFNP была более очевидной, чем цитотоксичность свободного раствора ICG при каждой тестовой концентрации. Тенденция цитотоксичности двух составов ICG соответствовала внутриклеточному распределению ICG, как показано на.Они предположили, что тепловой терапевтический эффект может зависеть от внутриклеточной концентрации ICG, а не от ее внеклеточной.

3.5.

C ₆ голых мышей с ксенотрансплантатом, несущих глиому, были сконструированы. Когда размер опухоли достигал 100 мм ³ , мышам внутривенно вводили свободный раствор ICG или ICG-SFNP, и визуализация in vivo и была получена в другой момент времени.Как показано на фиг.1, свободный ICG быстро распределялся в печени мышей, где отображался сильный сигнал FL. По мере увеличения времени ICG FL постепенно уменьшался in vivo и полностью исчезал через 12 ч после введения. Между тем, в каждый момент времени в зоне опухоли просто присутствовал какой-либо FL, что указывает на плохое распределение ICG в опухоли. Напротив, после введения ICG-SFNP, помимо печени, опухолевые ткани также имели некоторый сигнал FL, и его интенсивность со временем усиливалась.Через 8 ч после внутривенного введения ICG-SFNP ФЛ внутри зоны опухоли была наиболее сильной, а затем со временем стала слабее (). Действительно, аналогичная тенденция в FL наблюдалась также на ex vivo флуоресцентных изображениях каждого органа и опухолей через 12 часов (). Интенсивность ФЛ в опухоли для группы ICG-SFNP была примерно в восемь раз выше, чем у свободного раствора ICG (). Повышенное распределение ICG-SFNP в опухоли может быть связано с непрерывным накоплением наночастиц за счет усиленного эффекта проникновения и удерживания (эффект EPR) и более медленного клиренса ICG-SFNP (Gobin et al., 2006).

(A) In vivo визуализация бестимусных мышей BalB / C, несущих опухолевые клетки C ₆ , в различные интервалы времени после в / в. инъекция свободного раствора ICG или ICG-SFNP, (B) ex vivo флуоресцентных изображений основных органов и опухолей через 12 часов после внутривенного введения препаратов ICG, (C) статистическая средняя интенсивность флуоресценции в ткани ex vivo , (D) in vivo ультразвуковая эластография сдвиговой волной (SWE), визуализация опухоли (зона, отмеченная красными кружками) после 1 мин облучения NIR, и (E) тепловизионное изображение мышей с опухолью после 5 мин воздействия лазером NIR (808 нм, 1 Вт / см ² ).

3.6.

Для дальнейшего определения фототермического перехода в зоне опухоли после введения ICG-SFNP, in vivo ультразвуковая эластография сдвиговой волной (SWE) использовалась для оценки жесткости опухоли. . Поскольку повышение температуры улучшает местное кровообращение и делает ткани более мягкими, SWE обычно использовался для обнаружения фототермического эффекта PS при облучении (Marangon et al., 2017).Через 8 часов после внутривенной инъекции различных составов мышей с опухолью облучали в течение 5 минут лазером NIR, а затем немедленно измеряли SWE зоны опухоли. Как показано на фиг.3, у мышей, получавших PBS, не наблюдалось значительного изменения жесткости опухоли. Жесткость опухоли немного изменилась в группах, получавших свободный раствор ICG. Напротив, опухолевая ткань мышей, получавших ICG-SFNP, стала очевидно более мягкой после облучения, что указывает на существование фототермического перехода.В качестве альтернативы, температура внутри зоны опухоли также определялась тепловизором после облучения NIR. Как показано на рисунке, после введения ICG-SFNP температура внутри зоны опухоли значительно повысилась, демонстрируя лучший фототермический эффект, чем свободный раствор ICG. Эффективный фототермический переход был очень полезен для теплового терапевтического воздействия на опухоль.

3,7.

In vivo Противоопухолевая эффективность физиологического раствора (контроль), свободного раствора ICG (DOX-S) и ICG-SFNP дополнительно оценивалась в C ₆ с опухолью мышей под БИК-облучением.Как показано на фиг.3, опухоли, обработанные физиологическим раствором, росли быстрее, чем в других группах. Хотя обработка свободным раствором ICG оказывала в некоторой степени ингибирующее действие на рост опухоли, не было существенной разницы в размере опухоли между группой PBS и группой, свободной от раствора ICG. Относительные объемы опухоли через 14 дней после лечения PBS + NIR и свободным ICG + NIR составляли 38,82 ± 4,87 ( p <0,005) и 33,72 ± 1,90 ( p <0,005), соответственно. Напротив, очевидное ингибирование роста опухоли наблюдалось после обработки ICG-SFNP + NIR, и относительный объем опухоли в этой группе уменьшился до 0.55 ± 0,33. Кроме того, масса тела мышей с опухолями во всех группах незначительно выросла в процессе лечения, что свидетельствует о низкой токсичности этих терапевтических средств (). Подавление роста опухоли было тесно связано с повышением температуры внутри зоны опухоли. В группе PBS облучение NIR без ICG было недопустимым для повышения температуры внутри зоны опухоли, и, таким образом, в контрольной группе не наблюдалось никакого ингибирующего эффекта. По сравнению с лечением раствором свободного ICG, более высокое накопление ICG-SFNP внутри опухолевых тканей значительно повысило температуру внутри зоны опухоли после облучения NIR и, следовательно, привело к некрозу основной опухоли.

In vivo противоопухолевый эффект ICG-SFNP под облучением, (A) фотографии несущих опухоль мышей C ₆ в разные интервалы времени после лечения разными препаратами, (B) рассчитанный относительный размер опухоли ( V) / V ₀ ) и (C) вес тела мышей с опухолью на различных стадиях.

3.8. Системная токсичность ICG-SFNP

Нормальные органы, включая сердце, печень, селезенку, легкие и почки, дополнительно анализировали окрашиванием H&E для оценки токсичности ICG-SFNP.Результаты показаны на Рисунке S4. Независимо от лечения свободным раствором ICG или ICG-SFNP, не было заметных повреждений органов или воспалительных поражений в сердце, печени, селезенке, легких или почках мышей, что указывает на то, что ICG-SFNP не вызывают значительной токсичности у обработанных мышей. . Более того, исследование гемолиза in vitro и также подтвердило, что ICG-SFNP демонстрируют хорошую совместимость с кровью (рисунок S5). В целом, ICG-SFNP были безопасны и подходили для внутривенного системного введения.

(PDF) Безводное окрашивание хлопкового волокна реактивными красителями: обзор

222

|

TANG ANd KAN

34. Рабочая группа МАИР по оценке канцерогенного риска для

человека. Трихлорэтилен Т и некоторые другие хлорированные агенты.

Лион: Международное агентство по изучению рака; 2014. (IARC

Монографии по оценке канцерогенных рисков для людей,

№ 106.) ТЕТРАХЛОРТИЛЕН.https: //www.ncbi.nlm.nih.

gov / books / NBK29 4284 /? Repor t = classic. По состоянию на 12 января 2019 г.

35. Blanchard EJ. Окрашивание хлопка в гликолевых растворителях. Текст Res J.

1980; 50 (3): 147–152.

36. Чаван Р.Б., Субраманиан А. Крашение щелочью набухшей и щелочью

Набухший растворитель заменил хлопок на реактивный краситель. Текст Res J.

1982; 52 (12): 733–737.

37. Чаван Р.Б., Рао СП. Окрашивание набухшей в воде, замена растворителя

хлопка анионными красителями из смесей растворителей диметилформамид-трихлорэт-

илен.Текст Res J. 1983; 53 (5): 290–297.

38. Чаван Р., Субраманиан А. Окрашивание хлопка реактивным красителем из

полярно-неполярных систем растворителей. Текст Res J. 1983; 53 (9): 539–543.

39. Альбергина Г., Физикелла С., Окчипинти С. Использование растворителей в крашении целлюлозных волокон

. Цвет. 1989: 3–6.

40. Лим Ю.Дж., Ким Т.К., Чо К.Х. Реактивное окрашивание хлопка в смеси вода-

гановый растворитель. Сен-И Гаккаиси. 2001. 57 (1): 21–24.

41.Dong X, Gu Z, Hang C, Ke G, Jiang L, He J. Исследование бессолевого окрашивания хлопка с низкой щелочной реакционной способностью

с высокой концентрацией этанола

ноль в объеме. J Clean Prod. 2019; 226: 316–323.

42. Xia L, Wang A, Zhang C, et al. Экологически чистое окрашивание

хлопка в водно-этанольной смеси с отличным истощением.

Green Chem. 2018. 20 (19): 4473–4483.

43. Лю Д., Ма Дж, Ченг Х., Чжао З. Исследование проводимости

и микроструктуры АОТ / неионных поверхностно-активных веществ / воды / н-гептана

смешанных обратных мицелл.Коллоидный серфинг A-Physicochem Eng Asp.

1998; 135 (1): 157–164.

44. Luisi PL. Ферменты, находящиеся в обратных мицеллах в углеводородном растворе —

. Angew Chem-Int Ed Engl. 1985. 24 (6): 439–450.

45. Пилены М.П. Структура и реакционная способность обратных мицелл. Нью-Йорк,

Нью-Йорк: Амстердам; 1989.

46. Ускокович В., Дрофеник М. Обратные мицеллы: инертные нанореакторы

или физико-химически активные проводники закрытых реакций. Adv

Коллоидный интерфейс Sci.2007. 133 (1): 23–34.

47. Савада К., Такаги Т., Джун Дж., Уэда М., Льюис Д. Окрашивание природных волокон Fi-

в сверхкритическом диоксиде углерода с использованием неионогенного поверхностно-активного вещества, регенерирующего мицеллярную систему

стиха. Color Technol. 2002. 118 (5): 233–237.

48. Харрисон К., Говеас Дж., Джонстон К.П., О’Рир Е.А. III. Вода-в-

микроэмульсии диоксида углерода с гибридным поверхностно-активным веществом фторуглерод-углеводород

. Ленгмюра. 1994. 10 (10): 3536–3541.

49. Джонстон К.П., Харрисон К.Л., Кларк М.Дж. и др.Микроэмульсии ди-

оксидов воды в углероде: среда для гидрофилов, включая

белков. Наука. 1996. 271 (5249): 624–626.

50. Кларк М.Дж., Харрисон К.Л., Джонстон К.П., Хоудл С.М. Вода в сверхкритических микроэмульсиях диоксида углерода su-

: спектроскопические исследования

Создание новой среды для водной неорганической химии. J Am

Chem Soc. 1997. 119 (27): 6399–6406.

51. Савада К., Уэда М. Ферментативная обработка тканей в обратном ми-

подвальном растворе.J Biotechnol. 2001; 89: 263–269.

52. Савада К., Уеда М. Адсорбционные свойства прямого красителя на хлопке в неводной среде

. Красители Пигм. 2003. 58 (1): 37–40.

53. Савада К., Уэда М. Окрашивание белкового волокна в обратной мицеллярной системе

. Красители Пигм. 2003. 58 (2): 99–103.

54. Савада К., Уэда М., Кадзивара К. Одновременное крашение и ферментативная обработка тканей

обработка тканей в обращенной мицеллярной системе с неионным поверхностно-активным веществом

тем. Красители Пигм.2004. 63 (3): 251–258.

55. Савада К., Уеда М. Адсорбция и фиксация реактивного красителя на кроватке-

тонны в неводных системах. Color Technol. 2003. 119 (3): 182–186.

56. Савада К., Уэда М. Характеристики водных микроокружений

в обратных мицеллах неионных поверхностно-активных веществ и их использование в ферментативных реакциях

в неводных средах. J Chem Technol Biotechnol.

2004; 79 (4): 369–375.

57. Савада К., Уэда М. Ферментативная обработка шерстяных тканей в неионогенном поверхностно-активном веществе с обратной мицеллярной системой

.J Chem Technol

Biotechnol. 2004. 79 (4): 376–380.

58. Yi S, Dong Y, Li B, Ding Z, Huang X, Xue L. Адсорбция и фиксация —

Поведение CI Reactive Red 195 на хлопчатобумажной ткани

неионогенное поверхностно-активное вещество Triton X-100 обратное мицелла. Color Technol.

2012; 128 (4): 306–314.

59. Yi S, Deng Y, Sun S. Адсорбционные и красящие характеристики

реактивных красителей на хлопковом волокне в неионогенных обратных мицеллах Triton X-100

.Fiber Polym. 2014. 15 (10): 2131–2138.

60. Yi S, Tong X, Sun S, Dai F. Красящие свойства CI реактивного фиолетового

2 на хлопчатобумажной ткани в неионогенных обратных mi-

клетках TX-100 / Span40. Fiber Polym. 2015; 16 (8): 1663–1670.

61. Ван Й, Ли СН, Тан ИЛ, Кан CW. Окрашивание хлопка в растворителе алкан

с использованием обратной мицеллы на основе полиэтиленгликоля в качестве реактивного носителя красителя

. Целлюлоза. 2016; 23 (1): 965–980.

62. Тан АЙЛ, Ли СН, Ван И, Кан CW.Ре-

Вертикальное мицеллярное окрашивание хлопка реактивными красителями. Полимеры.

2017; 9 (12): 678.

63. Тан АЙЛ, Ли СН, Ван И, Кан CW. Красящие свойства хлопка

с реактивным красителем в нонановой неводной системе обратных мицелл.

СКУД Омега. 2018; 3 (3): 2812–2819.

64. Тан АЫЛ, Ван И, Ли СН, Кан CW. Сравнение компьютерной

подбора цвета обратного мицеллярного окрашивания на водной основе и на основе растворителя

окрашивания хлопкового волокна.Color Technol. 2018; 134 (4): 258–265.

65. Тан ЯЛ, Ван И, Ли Ч., Кан CW. Компьютерное согласование цвета

и выравнивание обратного мицеллярного декаметилциклопен-

тасилоксана (D5) на основе ПЭГ для реактивного окрашивания хлопкового волокна с помощью растворителя.

Appl Sci. 2017; 7 (7): 682.

66. Тан АЙЛ, Ли СН, Ван Ю.М., Кан CW. Влияние значений полового баланса (ГЛБ) гидрофильно-литий-ионного

неионного поверхностно-активного вещества на основе ПЭГ

на обратное мицеллярное окрашивание хлопкового волокна реактивными красителями в неводной среде

.Fiber Polym. 2018; 19 (4): 894–904.

67. Тан АЙЛ, Ли СН, Ван Ю.М., Кан CW. Окрашивание хлопка реактивными красителями

: сравнение традиционной системы окрашивания на водной основе

и системы обратного мицеллярного окрашивания на основе ПЭГ с добавлением растворителя.

Целлюлоза. 2019; 26 (2): 1399–1408.

68. Тан АЙЛ, Ли СН, Ван Ю.М., Кан CW. Исследование обратного мицеллярного окрашивания хлопчатобумажной ткани

на основе ПЭГ: реактивные красители с различными реактивными группами

. Целлюлоза.2019; 26 (6): 4159–4173.

69. Ли СН, Тан АЙЛ, Ван И, Кан CW. Эффект обратной агломерации ми-

инкапсулированных в клетках реактивных красителей в красящих свойствах-

галстука хлопка. Краска Свинья. 2019; 161: 51–57.

70. Тан АЙЛ, Ли СН, Ван Ю.М., Кан CW. Обратное мицеллярное окрашивание

хлопкового волокна реактивными красителями: исследование влияния pH

воды на жесткость. СКУД омега. 2019; 4 (7): 11808–11814.

71. Лю Дж.К., Мяо Х.Л., Ли С.З. Безводное окрашивание реактивных красителей в

D5.Adv Mater Res. 2012; 441: 138–144.

72. Fu C, Wang J, Shao J, Pu D, Chen J, Liu J. Безводное окрашивание

Процесс реактивного красителя на хлопке. J Text Inst. 2015; 106 (2): 152–161.

73. Fu C, Tao R, Wang J, Shao J, Liu J. Водосберегающая последующая обработка —

реактивно окрашенных хлопчатобумажных тканей в среде D5. J Text Inst.

2016; 107 (6): 719–723.

Avocado Dye Is, Naturally, Millennial Pink

Чтобы сделать натуральный краситель из авокадо, все, что вам нужно, — это косточки.Эти золотисто-коричневые семена, такие скользкие при первом удалении, содержат молочную жидкость, богатую танинами, которая превращается в поразительные красные чернила при кипячении в воде.

Сначала вымойте ямки и просушите их. Затем сварите их в кастрюле, наполненной достаточным количеством воды, чтобы покрыть ткань (примерно пять ямок на полфунта ткани). Когда семена танцуют вокруг жидкости, медленно сталкиваясь друг с другом, их скорлупа отслаивается и раскалывается, превращая воду в ярко-рубиново-красный цвет. Дайте настояться всю ночь.

На следующий день добавьте влажную ткань, пока цвет не станет правильным.(Любые предварительно выстиранные ткани следует замочить в теплой воде накануне вечером, чтобы цвет приобрел цвет.) Не стремитесь к совершенству: каждая попытка будет отличаться от других, несовершенных, потусторонних и розовых.

Этот обманчиво простой процесс — форма искусства в руках г-жи Помбо. 30-летний дизайнер одежды из Венесуэлы является частью группы миллениалов, которые работают с красителями на растительной основе, которые, как правило, более экологичны и используют овощные отходы, от которых в противном случае можно было бы отказаться.В своей студии, расположенной на промышленном участке улицы Ингрэм-стрит в районе Ист-Вильямсбург в Бруклине, г-жа Помбо создает изысканную одежду на заказ, окрашенную всеми видами органических отходов, в том числе скорлупой грецкого ореха, семенами аннато и кожурой лука. Но косточки авокадо — ее основная среда.

Ее компания Fragmentario — это в равной мере модный эксперимент и образовательная инициатива. Помимо продажи одежды, г-жа Помбо предлагает мастер-классы по извлечению завораживающих цветов из растительных материалов.

Результаты неодинаковы по своей природе. Изменения минеральности воды и pH, не говоря уже о неизбежном добавлении загрязняющих веществ, влияют на оттенки красителей на растительной основе. Жесткая вода, богатая минералами, такими как кальций и магний, может сделать цвета более яркими, а более мягкая вода дает более приглушенные тона. Волокна растительного происхождения, такие как хлопок или лен, обычно смягчают краску, тогда как волокна животного происхождения, такие как шерсть или шелк, дают более насыщенные оттенки.

Но г-жа Помбо подходит к своим пигментам с методической чувствительностью, которая отражает ее предыдущее образование в области инженерии.В ее студии есть мензурки, горелки, щипцы и кувшины, наполненные водой со всего мира, а также подробные таблицы, в которых отслеживаются эксперименты с красителями и тесты. «Я делаю этот ручной процесс, но он очень контролируемый», — сказала она.

Авокадо, до миллениалов

Мы можем поблагодарить гигантских доисторических ленивцев за распространение авокадо. Лестодоны, как называют ленивцев, могли вырасти до 15 футов в длину, и они проводили свои дни, бродя по Южной Америке в кайнозойскую эру, глотая авокадо целиком и раскидывая вслед за ними фруктовые деревья.Хотя люди начали выращивать этот фрукт еще 5000 лет назад, одно из самых ранних опубликованных описаний авокадо датируется 1519 годом: «Съедобный плод», как писал географ и конкистадор Мартин Фернандес де Энсизо в документе под названием Suma de geographia, является «Как масло» и «с чудесным вкусом, настолько приятным и приятным на вкус, что это чудесная вещь».

Семена по понятным причинам играют второстепенную роль после этого «чудесного» фрукта — сейчас они настолько востребованы, что Соединенные Штаты импортировали почти 2 миллиарда фунтов авокадо Хасс из Мексики только в 2018 году.Но есть свидетельства того, что эта скромная яма издавна использовалась для красителей или чернил. В статье, опубликованной в 1964 году, испанский историк искусства Сантьяго Себастьян написал, что многие сохранившиеся документы, оставшиеся после испанского завоевания Центральной и Южной Америки, были написаны чернилами, полученными из семян. И его применение к текстилю восходит к поколениям, хотя это часто не сохраняется в письменных источниках.

«Розовый авокадо — это немного загадка», — сказала Дженнифер Гомес Мендживар, доцент кафедры испанских и латиноамериканских исследований в Университете Миннесоты в Дулуте.«То, что мы знаем об этом, сохранилось в устных рассказах». Например, люди куна, которые жили на северо-востоке Панамы и соседних островах Сан-Блас с доиспанских времен, упоминают использование авокадо для окрашивания тканей в своей истории создания. Но следы шерсти альпаки и ламы, окрашенной семенами авокадо, были обнаружены и в археологических раскопках, особенно в высокогорных районах Анд, где проживали народы аймара и кечуа.

В отличие от красителей, сделанных из кожуры или цветков лука, где конечный продукт часто очень похож на цвет материала, краситель семян авокадо «очень волшебный», — сказала г-жа Мис.- сказал Помбо. «Я бы никогда не подумал, что он будет розовым».

Есть много видов авокадо и, следовательно, много возможных оттенков розового авокадо; этот вид, входящий в семейство лавровых, обычно делится на три ботанические расы — мексиканскую, гватемальскую и вест-индийскую, но перекрестное опыление позволяет создавать неограниченное количество разновидностей.

Сорт, который рос во дворе г-жи Помбо в ее семейном доме в Каракасе, называется Фуэрте, зеленокожий, грушевидной формы и вдвое больше сорта Хасс, обычно встречающегося в США.S. Когда созреют, семя заявляет о себе, грохоча в канавке внутри плода, как марака. Эти авокадо, по словам г-жи Помбо, «напоминают мне о доме».

Но для своей первой коллекции одежды, окрашенной авокадо, она использовала семена авокадо Hass, полученные из четырех различных гастрономов в Бушвике. Поскольку места для хранения в гастрономе были ограничены, это означало, что приходилось ездить в каждое место два раза в неделю, чтобы каждый раз собирать около 20 ям. Это также означало, что часы потрачены на то, чтобы догонять владельцев и сотрудников, когда г-жаПомбо заскочила за пикапом.

Результатом стала линия форменной одежды, доступная из льна, шелка или смеси шелка, органзы и хлопка, окрашенных вручную — вплоть до пуговицы — в пыльно-розовый оттенок, напоминающий кость. -сухая роза. Одежда, которая продавалась через Instagram, была недешевой: цены варьировались от 300 долларов за льняную рубашку до 1580 долларов за шелковую куртку из шантунга. Но г-жа Помбо сказала, что тщательно изготовленные предметы должны быть предметами семейной реликвии — уникальными и передаваемыми по наследству.«Идея состоит в том, чтобы сбавить темп и более вдумчиво относиться к тому, что мы потребляем», — сказала она.

One Man’s Trash

Прошлым летом на одном из семинаров г-жи Помбо по окрашиванию лука, который проводился в McLeod’s Community Garden в Браунсвилле, Бруклин (и предлагался бесплатно за счет гранта Нью-Йоркского реставрационного проекта) почти 50 участники собрались вокруг мусорных ведер, заполненных промокшими луковыми шкурами, ожидая своей очереди замочить шарфы и банданы. Кусочки детрита смешались с тканью, пока она намокала, придавая шармезу и шифону ржаво-красный оттенок.

Пока участники терпеливо ждали, пока алхимия подействует, г-жа Помбо рассказала о красоте, которую можно получить из пищевых отходов.

«Мы задаем много вопросов о том, откуда берутся наши продукты, но мы не думаем так же о текстиле», — сказала г-жа Помбо. «Используя пищевые отходы, вы даете им вторую жизнь, создавая красоту чего-то, что можно было бы считать мусором». (Сейчас г-жа Помбо получает свои семена в Arepera Guacuco, венесуэльском ресторане в Бруклине. Каждую неделю ресторан наполняет банку Mason размером с галлон примерно на 100 косточек для ее использования; она измельчает большинство из них с помощью Vitamix для облегчения хранения. .)

Ее бабушка по материнской линии, Лигия де Рейес, сидела в белом пластиковом кресле для патио поблизости, сияя гордостью. 80-летняя г-жа Рейес впервые приехала в Бруклин из Кабимаса, Венесуэла. Ее семья медленно покинула Венесуэлу, но в настоящее время в основном она вынуждена покинуть страну, которая погрязла в серьезном экономическом коллапсе и разрухе.

«Я не знала, как иметь такую ​​фрагментированную семейную структуру», — сказала г-жа Помбо. Ее родители находятся в Канаде, а брат живет в Лондоне.Но обе ее бабушки остаются в Венесуэле. «Ностальгия сейчас является такой частью моей личности, потому что я не могу просто вернуться домой», — сказала она. «То, что осталось, — это оболочка того, что было когда-то».

В 2018 году г-жа Помбо получила право подать заявление на получение грин-карты, что означало, что она вообще не могла покинуть США. Это было тяжелое изменение; мастерские по семенам авокадо привели ее в Италию, Испанию и Германию, где она проводила мастер-классы; В каждом городе был получен уникальный оттенок «розового авокадо» из-за различных свойств воды и условий окрашивания.(Вода в Барселоне и Мадриде привела к более красноватым оттенкам, но именно жесткая вода Парижа давала наиболее ярко-розовый цвет.)

Понимая, что она не сможет какое-то время путешествовать, г-жа Помбо начала просить друзей послать ей воду из своих путешествий. Незнакомцы и фанаты в социальных сетях последовали его примеру. Бутылки начали прибывать из Чикаго, Нью-Дели и интересных источников, таких как Мертвое море. «Получать эту воду от людей — это было действительно прекрасно», — вспоминала г-жа Помбо, заметно тронутая.Пребывание в Нью-Йорке помогло ей найти новый способ связи с миром. Начала формироваться вторая линия одежды. «Все были частью коллекции», — сказала она. «Это вдохновило меня на то, каким может быть цвет, на чувство игривости».

Новые изделия из шелка, сделанные на заказ, стоят от 300 долларов за шарф до 2200 долларов за платье из шелковой органзы со складками вручную. Силуэты аналогичны ее последней коллекции, но на этот раз прозрачные ткани собраны и обработаны паром перед окрашиванием, а оттенки колеблются между тонами румян, ржавчины и розы.Результаты выглядят необъятными, громоздкими и непредсказуемыми, отражая изменчивость различных образцов воды со всего мира.

Одна из ее лучших подруг из Венесуэлы, обосновавшаяся в Сан-Луис-Потоси, Мексика, поскольку срок ее паспорта истек, а Венесуэла не выдала ей новый, долгое время не могла посетить Нью-Йорк.