New TOUCH — Окраска корней волос
Виды окрашивания отросших волос
Каждая женщина мечтает о здоровых, красивых и ухоженных волосах. Многие для придания локонам большей яркости предпочитают использовать окрашивание. Но этот способ придания волосам дополнительной привлекательности имеет существенный недостаток: локоны быстро отрастают, в результате чего становится заметным естественный цвет волос у корней, который нередко разительно отличается от окрашенных прядей. Чтобы отросшие локоны не испортили внешний облик их обладательницы, рекомендуется регулярно окрашивать пряди у корней, поскольку за месяц волосы отрастают в среднем на 1-2 см. Выполнение такой процедуры, как окраска волос у корней, для получения максимального эффекта лучше предоставить профессионалам.
В каких случаях требуется окраска волос у корней
- имеется свыше 50% седых волос;
- хочется выровнять цвет и освежить причёску;
- цвет окрашенных локонов заметно отличается от их естественного оттенка.
Мода отличается своей цикличностью и не так давно отросшие корни естественного цвета пользовались большой популярностью. Но подобный стиль подойдёт только представителям молодого поколения. Большинство женщин предпочитают прибегать к такой процедуре, как дополнительная окраска волос. Тёмные корни, разительно контрастирующие с основным цветом волос, отнюдь не добавят ухоженности и привлекательности внешнему облику.
Окраска корней волос: полезные советы
Процедура окрашивания корней волос является обязательной для обладательниц окрашенных локонов. Волосы растут у всех с различной скоростью, но в определённый момент всё же потребуется дополнительная окраска волос. Тёмные корни, существенного отличающиеся от полученного после окрашивания оттенка, обеспечат определённый дискомфорт обладательнице локонов. Для того, чтобы сохранить внешний облик безупречным, следует регулярно подкрашивать волосы в прикорневой зоне. Чтобы
- За 2 суток до планируемой окраски необходимо сделать тест на аллергическую реакцию. Нужно нанести немного краски, выбранной для последующего окрашивания волос, на участок кожи в области локтевого изгиба руки. Если на протяжении 48 часов на данном участке кожи не будут заметны покраснения, такую краску можно смело применять для окрашивания волос у корней.
- Целесообразнее всего окрашивать отросшие пряди красящим составом, имеющим третью степень стойкости, поскольку оттеночным красителям подобная задача окажется не по силам. Окраска седых корней волос должна производиться только красящим составом, имеющим максимальную степень стойкости.
- Недорогие, не отличающиеся должным уровнем качества краски, применять для этой цели не рекомендуется. Они содержат в своём составе значительное количество аммиака, раздражающего слизистую глаз. Кроме того, аммиак отрицательно воздействует на состояние локонов и кожи головы.
- В период беременности и грудного вскармливания окрашивать отросшие пряди красящими составами, имеющими в составе аммиак, категорически нельзя.
- Не рекомендуется окрашивать отросшие корни волос чаще, нежели 1 раз в 3 недели, даже если волосы отрастают достаточно быстро.
- Поскольку отросшие пряди в большинстве случаев заметно отличаются по цвету от окрашенных локонов, необходимо чётко придерживаться рекомендуемого времени в процессе окрашивания. Необходимое для получения желаемого результата количество времени всегда указывается в прилагаемой к краске инструкции.
- Перед нанесением краски необходимо предварительно убрать все средства, использованные для укладки. Мыть голову перед самой процедурой необязательно, в особенности это относится к сухому типу волос.
Нужно нанести немного краски, выбранной для последующего окрашивания волос, на участок кожи в области локтевого изгиба руки. Если на протяжении 48 часов на данном участке кожи не будут заметны покраснения, такую краску можно смело применять для окрашивания волос у корней.
Как проходит процедура окрашивания отросших корней
Окраска корней волос нуждается в тщательной подготовке и внимательном проведении самой процедуры. Выровнять тон окрашенных и отросших прядей легче всего блондинкам. Непросто получить идеальный оттенок обладательницам рыжих и чёрных волос.
Вначале необходимо осветлить отросшую часть. После этого нужно равномерно распределить краску по прикорневой области и оставить примерно на 35 минут. Затем красящий состав следует нанести на всю длину волос и спустя 5-10 минут смыть его. Такая технология позволяет замаскировать корни и обновить цвет без получения видимой границы.
Большого опыта требует окраска седых корней волос. Если седина превышает половину основного объёма волос, вначале необходимо произвести пигментацию, в противном случае получится некрасивый переход. Это относится к случаям, когда требуется окрасить волосы на пару оттенков светлее их естественного цвета либо сделать их на тон темнее.
Самостоятельное окрашивание отросших корней обладает рядом существенных недостатков. В этом случае высока вероятность прокрашивания кожи около волосяного покрова. Кроме того, получить желаемый эффект при самостоятельном окрашивании отросших волос у корней довольно затруднительно. Чаще всего в итоге получается неравномерный цвет волос, при котором оттенок у корней заметно отличается от основного объёма волос.
По этой причине рекомендуется доверить проведение процедуры подобного рода специалистам. Профессионалы используют специальные технологии при окрашивании волос и смогут подобрать пигмент, максимально соответствующий имеющемуся оттенку. Окраска отросших корней волос опытным специалистом в салоне красоты позволит добиться равномерного оттенка по всей длине локонов, что обеспечит их обладательнице привлекательный и аккуратный внешний вид.
Окрашивание корней волос в Киеве в салоне красоты Status&Style
Главная > Окрашивание волос > Окрашивание корней волос
Окрашивание корней цена
| Услуга | Мастер | ТОП Мастер |
|---|---|---|
| Окрашивание корней до 2-х см (краситель + работа + финишная укладка) | ||
| КОРНИ L’oreal Majirel, DiaRichesse (France) | ||
| 1 длина | 1250 | +200 |
| 2 длина | 1350 | +200 |
| 3 длина | 1450 | +200 |
| 4 длина | 1550 | +200 |
| 5 длина | 1650 | +200 |
| КОРНИ INOA Premium permanent (France) / Super Blond | ||
| 1 длина | 1350 | +200 |
| 2 длина | 1450 | +200 |
| 3 длина | 1550 | +200 |
| 4 длина | 1650 | +200 |
| 5 длина | 1750 | +200 |
| Первичное окрашивание (краситель + работа + финишная укладка) | ||
| L’oreal Majirel, DiaRichesse (France) | ||
| 1 длина | 1750 | +200 |
| 2 длина | 2050 | +200 |
| 3 длина | 2250 | +200 |
| 4 длина | 2600 | +200 |
| 5 длина | 2800 | +200 |
| INOA Premium permanent (France) / Super Blond | ||
| 1 длина | 2000 | +200 |
| 2 длина | 2300 | +200 |
| 3 длина | 2600 | +200 |
| 4 длина | 3000 | +200 |
| 5 длина | 3500 | +200 |
| ***PLEX (защита волос во время окрашивания) | ||
| Olaplex «Bond Multiplex» зашита | от 400 | +200 |
SmartBond, Olaplex, Prolonger, Acidic Sealer и пр. | 1мл-25грн | +200 |
| Другие (сложные) виды окрашивания | ||
| ***AirTouch, Омбре, Шатуш, Балаяж, Калифорнийское мелирование и пр. — каждая работа индивидуальна. Цена зависит от: исходной базы (цвета) волос, густоты, длины, пористости и Ваших пожеланий. Для уточнения точной стоимости необходимо лично подойти на предварительную консультацию с мастером. Консультация бесплатная. | от 2000 | +200 |
| Выход из черного в светлый *цена зависит от кол-ва шагов декапажа и пигментации | от 3500 | +200 |
| Окрашивание волос краской клиента | ||
| 1 длина | 800-900 | +200 |
| 2 длина | 900-1000 | +200 |
| 3 длина | 1000-1200 | +200 |
| 4 длина | 1100-1300 | +200 |
| 5 длина | 1200-1500 | +200 |
Окрашивание корней волос: профессиональный подход как залог эстетики
Покраска корней в салоне – это решение, к которому прибегает множество представительниц прекрасного пола.
Причин этому несколько:
- На корни расходуется совсем немного красящего состава и окислителя, соответственно, покупать целую упаковку набора для окрашивания ради обработки участка шевелюры нецелесообразно.
- Чтобы переход до волос, на которых сохранился искусственный пигмент, выглядел гармонично, зачастую требуется обесцвечивание корней, смешивания тонов в определенных пропорциях, что вряд ли получится в домашних условиях.
- Использование тонирующих бальзамов и масок во многих случаях чревато малоприятными сюрпризами – после их применения стойкая краска может повести себя непредсказуемо, на волосах могут появиться полосы и пятна.
Тоже не хотите рисковать? Наш салон красоты предлагает выполнение покраски корней в Киеве. Запишитесь к нашим специалистам, и гарантированно получите желанный результат.
Окрашивание корней волос в Киеве: перечень услуг нашего салона
Окрашивание корней необходимо в следующих случаях:
- Если отросшие корни составляют противоположность основному цвету. Так, требуется окрашивание волос, когда темные корни выделяются на фоне однотонной покраски в более светлую или яркую гамму, и наоборот, светлые корни тонируются в темный для равномерного «свежего» цвета.
- Если на отросшей части очень заметная седина.
- Если хочется получить интересный эффект – корни красятся в яркие оттенки, или выполняется «растяжка» от корней к основному цвету, которая обеспечивает мягкий переход (от русого к пшеничному и т.д.). Для волос с мелировкой (шатуш, балаяж, омбре и т.д.) со светлыми прядями окрашивание волос с затемнением корней позволяет долго поддерживать аккуратный вид за счет плавного градиента.
Так, требуется окрашивание волос, когда темные корни выделяются на фоне однотонной покраски в более светлую или яркую гамму, и наоборот, светлые корни тонируются в темный для равномерного «свежего» цвета.Окрашивание корней волос в блонд зачастую выбирает креативная молодежь – при желании на осветленную часть можно легко наносить временную краску нестандартных тонов, которая легко смывается при необходимости вернуться к более сдержанному образу.
Качественное окрашивание корней волос по разумной цене: с нами это возможно
Правильная покраска корней волос – это не обязательно дорогостоящая процедура.
Мы понимаем, что каждая девушка и женщина достойна выглядеть шикарно, и поэтому устанавливаем лояльные расценки. В салоне работают профессиональные колористы, используются проверенные средства и современные парикмахерские инструменты, так что качество услуг соответствует всем стандартам. Приходите к нам – и ваш стиль будет вызывать массу комплиментов!
Окрашивание микоризных корней | INVAM
Окрашивание микоризных корней
При отборе проб корней для обнаружения и/или измерения количества микоризных колоний важно выбрать более тонкие, более волокнистые корни. Старые корни или корни растений со стержневыми или другими грубыми корнями могут иметь некоторое количество микоризы, но колонизация обычно редкая и состоит только из гиф, которые часто наиболее заметны вне корней. Для растений с мочковатой корневой системой достаточно случайной выборки. Следует избегать темных пигментированных корней — их использование означает прохождение дополнительного этапа обесцвечивания (обычно достаточно инкубации в 5% бытовом отбеливателе в течение 5-10 минут, но это следует проверить эмпирически).
Помещение в пластиковые кассеты
Корни в пластиковые кассетыПосле тщательной промывки для удаления всех частиц корни помещают в пластиковые кассеты, используемые в медицине для обработки биопсийных тканей. Продаются кассеты разных типов (Fischer, Ted Pella и др.), но лучшими для образцов корней являются прямоугольные с отверстиями 0,9 мм (фото справа). Кассеты с большими отверстиями приводят к выпадению корней, особенно при разрезании корней на мелкие фрагменты. Свободно упакуйте корни в кассеты (макс. 0,1–0,2 г) для максимальной инфильтрации растворов.
Автоклавирование до кипячения
Химический стакан над горелкой Бунзена Корни очищают (удаление цитоплазматического содержимого из клеток) с использованием горячего 10% КОН. Используются разные подходы, от автоклавирования кассет в течение 5-10 минут до их кипячения в безопасном контейнере на лабораторном столе. Многое зависит от количества одновременно обрабатываемых образцов. Обычно мы обрабатываем только 10-20 образцов за раз.
Чтобы свести к минимуму перемешивание, мы предварительно кипятим КОН в большом стакане над лабораторной нагревательной плитой или горелкой Бунзена и сразу же добавляем кассеты, когда горелка выключается. Время инкубации зависит от толщины и хрупкости корней, но обычно достаточно 10 минут. Более старые и толстые корни требуют более длительного времени инкубации. Потемнение раствора свидетельствует о процессе очистки.
Подкисление корней
Поскольку большинство гистологических красителей, используемых для этой процедуры, являются кислыми, крайне важно, чтобы корни были подкислены. Итак, промываем корни (4-5 раз), а затем погружаем кассеты в 2%-ную HCl на 15-20 минут. Для корней из сильно щелочных почв рекомендуется более длительное время инкубации. Если корни равномерно темные, а микоризу трудно увидеть, причиной часто является неправильная очистка.
Морилка
Повторяют ту же процедуру, описанную выше, для очистки корней, только с 0,05%-ным прямым синим или другим подходящим красителем (кислый фуксин, хлоразоль черный Е).
Краситель готовят путем смешивания с водой, глицерином и молочной кислотой в пропорциях 1:1:1 (об./об./об.). Время инкубации варьируется, но 3-4 минуты лучше всего подходят для растений, выращенных в теплице. На фотографии справа кассеты с корнями были добавлены в раствор для окрашивания, нагретый на лабораторном столе с помощью лабораторной нагревательной плиты, с отключением нагрева, когда раствор закипел. Этот шаг может быть выполнен без применения тепла, но тогда инкубационный период должен быть продлен до 12 часов.
Краситель сливают в другую емкость (можно использовать повторно 1-2 раза после фильтрации через марлю) или выбрасывают в урну. Промойте кассеты 4–5 сменами воды и храните в воде при температуре 4°C. Больший контраст между тканью гриба и фоновыми растительными клетками достигается, когда образцы хранятся в воде в течение недели или дольше в холодильнике (избыток красителя вымывается из корней).
Долгосрочное хранение
Водно-глицериновая смесь Для длительного хранения окрашенных корней мы помещаем их в стеклянные пробирки с завинчивающейся крышкой, содержащие водно-глицериновую смесь (2:1 по объему) с 1-2 каплями 0,1% азид натрия при 4°С.
Окрашивание сохраняется в грибковой ткани в течение > одного года. Корни также можно хранить в фиксирующих растворах (например, в формалине), но только если вы хотите заболеть аллергией, раком или другими возможными проблемами со здоровьем.
| Mycorrhiza, окрашенная 0,05% кислотным фуксином в качестве альтернативного пятна | |
|---|---|
СПИСУАКТЫ
- . 1970. Усовершенствованная процедура очистки корней и окрашивания паразитических и везикулярно-арбускулярных микоризных грибов для быстрой оценки инфекции. Transactions Британского микологического общества 55:158-161. (классическая бумага)
- Коске, Р. Э. и Дж. Н. Джемма. 1989. Модифицированная процедура окрашивания корней для выявления микоризы VA. Микологические исследования 92:486-505.
- МакГонигл, Т. П., М. Х. Миллер, Д. Г. Эванс, Г. Л. Фэирчайлд и Дж. А. Свон. 1990. Новый метод, дающий объективную оценку колонизации корней везикулярно-арбускулярными микоризными грибами.
Новый метод, дающий объективную оценку колонизации корней везикулярно-арбускулярными микоризными грибами. - Споры
- Микориза
- —Окрашивание корней
- — Сбор гиф
- Методы культивирования
- Ваучеры
- Хранение прививки
- Контроль качества
- Анализы на инфекционность
- Анализ ДНК
- Методы заархивированы
- Часто задаваемые вопросы
Окрашивание и микроскопия микоризных грибковых колоний в законсервированных эрикоидных корнях растений
В разделе содержания.
Выберите эту ссылку, чтобы перейти к навигации
Тип статьи: Исследовательская статья
Авторы: Кихери, Хейкки a; б; * | Хейнонсало, Юсси и | Тимонен, Сари а
[a] Департамент пищевых продуктов и наук об окружающей среде, отделение микробиологии и биотехнологии, Хельсинкский университет, Финляндия | [б] Институт природных ресурсов Финляндии (Люк), Хельсинки, Финляндия
Корреспонденция: [*] Автор, ответственный за переписку: Хейкки Кихери, Институт природных ресурсов Финляндии (Люк), П.О. Box 2, FI-00791 Хельсинки, Финляндия. Тел.: +358 29 5324576; Электронная почта: [email защищен].
Ключевые слова: эрикоид, микориза, темнопольная микроскопия, окраска трипановым синим, микоризная колонизация
DOI: 10.3233/JBR-170160
Journal: Journal of Berry Research, vol. 7, нет. 4, стр. 231-237, 2017
Поступила в редакцию 19 декабря 2016 г.
|
Принято 2 мая 2017 г.
|
Опубликовано: 4 декабря 2017 г.
Получить PDF
Abstract
ПРЕДПОСЫЛКИ:
Визуализация эрикоидной микоризной колонизации с использованием традиционных методов основывается либо на свежих образцах, либо на образцах, хранящихся в КОН. Растущий интерес к изучению эрикоидной микоризации высветил потребность в методах, которые можно было бы использовать для консервированных образцов и которые легко реализовать с помощью общедоступного оборудования.
ЦЕЛЬ:
Целью данного исследования было усовершенствование традиционных методов окрашивания эрикоидных микоризных грибов и микроскопической визуализации сохранившихся корней эрикоидных микориз.
МЕТОДЫ:
Корни эрикоидной микоризы помещали в КОН или замораживали при –20 °C для длительного хранения.
Традиционные методы окрашивания трипановым синим были модифицированы, чтобы уменьшить повреждение тонких микоризных гиф и клеток коры. Для четкой визуализации окрашенных микориз применяли метод микроскопии в темном поле с высокой интенсивностью света. Новое приложение сравнивали с другими широко используемыми практиками.
РЕЗУЛЬТАТЫ:
Окрашивание трипановым синим без хранения или очистки KOH позволило успешно окрасить корни эрикоидной микоризы, хранившиеся при –20 °C. Применение высокоинтенсивной темнопольной микроскопии позволило получить высококонтрастную визуализацию микоризных структур.
ВЫВОДЫ:
Модифицированный метод окрашивания трипановым синим оказался эффективным на образцах замороженных корней, при этом темнопольная микроскопия особенно эффективна для визуализации темных корней. Преимуществом этого метода является низкая стоимость и относительно быстрое время применения. Таким образом, этот метод является реалистичным вариантом для крупномасштабных анализов большого количества образцов, требующих длительного хранения.
1Введение
Растительность под ярусом бореальных лесов состоит преимущественно из эрикоидных растений, ягоды которых являются важным источником питания для многих организмов. Эрикоидные растения полагаются на микоризные грибы для доступа к органическим питательным веществам в суровых, бедных питательными веществами условиях [2]. Эрикоидные микоризные растения важны как для производства дикорастущих, так и культивируемых ягод в самых разных экосистемах. Это привело к возрастающему интересу к изучению эрикоидного микоризного симбиоза из-за его экологического значения, а также сельскохозяйственного потенциала. Эрикоидные растения голубики высокорослой ( 9Было показано, что 0164 Vaccinium corymbosum L.), инокулированные микоризными грибами, улучшают рост и защищают от патогенов растений при снижении потребности в удобрениях [4, 9, 11]. Недавние данные исследований генома грибов показывают, что виды эрикоидных грибов обладают значительной способностью к разложению органического вещества почвы, поскольку их геномы содержат большое количество генов, разрушающих углеводы [3].
Несмотря на эту способность, экосистемы, в которых преобладают эрикоидные и эктомикоризные грибы, хранят наибольшее количество наземного углерода на Земле [1]. Поскольку их роль в секвестрации наземного углерода еще недостаточно изучена, исследования, посвященные эрикоидным растениям и их микоризным симбионтам, будут представлять большой интерес в будущем. Также необходимо исследовать функции эрикоидной микоризы на коммерческих полях голубики [10].
Корни эрикоидных растений имеют тонкую структуру, а эрикоидные микоризы обычно не образуют оболочки гиф, поэтому наличие колонизации эрикоидными микоризами можно подтвердить только с помощью микроскопии с помощью окрашивания гиф грибов. Существует несколько методов окрашивания корней эрикоидной микоризы для микроскопии, многие из которых основаны на оригинальной статье Филлипса и Хеймана [8]. Например, Koske & Gemma [5], Nestby et al. [7], Садовски и др. [10] и Scagel [12] использовали модифицированные методы Phillips & Hayman [8], включающие очистку корней в КОН с последующим подкислением и последующим окрашиванием.
Как сообщают Koske & Gemma [6], обработка 10% КОН «жесткая и может привести к потере коры большей части корневой системы». Это особенно заметно в корнях, которые должны храниться в течение длительного времени и требуют хранения KOH или замораживания при -20 ° C, причем замораживание часто необходимо для молекулярных и химических анализов. Таким образом, существует очевидная необходимость в разработке и испытании методов окрашивания для микроскопии хрупких и тонких эрикоидных корней растений, которые хранились в замороженном виде. Кроме того, поскольку многие исследовательские проекты, связанные с эрикоидными растениями, предназначены не для изучения колонизации эрикоидной микоризой, а скорее для изучения других экологических или коммерческих аспектов эрикоидных растений, было бы полезно иметь возможность повторно анализировать образцы замороженных корней из таких экспериментов. Эта возможность позволит лучше понять экологию эрикоидной микоризы и ее значение для выращивания ягод.
Цель исследования заключалась в разработке простого, быстрого и щадящего метода окрашивания и визуализации сохранившихся эрикоидных корней растений для микроскопического обнаружения микоризной внутриклеточной колонизации.
2Материалы и методы
Эрикоидные виды Vaccinium myrtillus , Vaccinium vitis-idaea и Calluna vulgaris экспериментально выращивались в течение 18 месяцев в гомогенизированном естественном лесном гумусе в условиях, имитирующих бореальный лес [3]. Растениям давали возможность естественным образом образовывать эрикоидные микоризные симбиозы внутри своих корней. Образцы корней промывали вручную холодной водопроводной водой для удаления излишков почвы.
2.1 Окрашивание
Образцы корней хранили при –20 °C и в 10% растворе КОН для проверки влияния длительного хранения (6 месяцев) на корни с эрикоидной микоризой. Образцы корней были подготовлены для микроскопической визуализации микоризной колонизации с использованием метода окрашивания трипановым синим, модифицированного Филлипсом и Хейманом [8]. Второй набор образцов хранили в 10% КОН в течение 1 дня или 3 дней при комнатной температуре и инкубировали в трипановом синем при 90 °C в течение 30 минут, чтобы проверить, предотвращает ли сокращение времени на обоих этапах повреждение тонких клеток коры корня.
Замороженные образцы брали непосредственно при температуре –20 °C и инкубировали в растворе молочной кислоты и глицерина 1 : 1, содержащем 0,05% трипанового синего, при 90°С в течение 30 минут. Замороженные корни не обрабатывали КОН для очистки и поэтому не требовали нейтрализации в HCl. Для сравнения с тестируемыми методами длительного хранения свежие корни C. vulgaris помещали в трипановый синий на 10 минут при комнатной температуре.
Сразу после окрашивания трипановым синим все образцы корней помещали в раствор молочной кислоты и глицерина для обесцвечивания 1 :1 при комнатной температуре на 15 минут для удаления избытка красителя. Затем отдельные сегменты корней помещали на предметные стекла для микроскопии. Несколько корневых сегментов из каждого образца помещали параллельно под одно и то же покровное стекло размером 20×50 мм и заливали чистым раствором для обесцвечивания, который затем запечатывали по бокам прозрачным лаком для ногтей.
2.2Микроскопия
Микроскоп Zeiss Axioskop 2 Plus (Zeiss, Оберкохен, Германия) использовали в режиме проходящего света с ахроматическим-апланатическим универсальным конденсором (0,9 H D Ph DIC) в режиме темного поля и передней линзой на месте.
Каждое подготовленное предметное стекло наблюдали через объектив A-Plan 40×/0,65 (Ph3 Var2) при максимальном освещении и полностью открытых диафрагмах. Высота конденсора была отрегулирована почти до верхнего максимального положения для обеспечения оптимального освещения образцов. Это было достигнуто путем отражения косых световых лучей в растворе для заливки, окружающем корневые волокна, что обеспечивает повышенный контраст корней и окрашенных клеток микоризы гриба. Тщательная настройка фокуса позволила визуализировать признаки колонизации грибков в нескольких плоскостях. Использование этого метода на более старых микроскопах, таких как Axioskop 1 (Zeiss, Оберкохен, Германия), не идеально, поскольку их источников света недостаточно, для четкой визуализации рекомендуется источник света мощностью 100 Вт.
Предостережение: интенсивность света следует увеличивать до максимума только после того, как предметное стекло установлено на место для наблюдения, так как раствор для заливки снижает уровень освещенности до безопасного для просмотра уровня.
2.3Оценка процента колонизации
Используя этот метод для четкой визуализации корней эрикоидной микоризы, можно количественно оценить колонизацию с помощью метода увеличенных пересечений [6]. Этот метод выполняется путем регистрации статуса микоризной колонизации каждого корневого волокна, когда он пересекается перекрестием окуляра вдоль вертикального разреза при увеличении в 400 раз. Обычно по длине слайда делается от 50 до 200 вертикальных разрезов. Этот метод позволяет проводить простой анализ колонизации на каждом пересечении перекрестия окуляра.
3Результаты
Хранение эрикоидных корней в 10% КОН в течение 1 и 3 дней сильно повреждало клетки коры всех тестируемых видов, при этом почти все корни полностью разрушались (рис. 1А). Прямое окрашивание свежих корней C. vulgaris (рис. 1Б) позволило получить высококачественную темнопольную микроскопическую визуализацию грибковых структур, но метод лиофилизации дал еще лучшие результаты, даже после длительного хранения корней при –20 °C ( Рис.
1С). Визуализация микоризной колонизации методом лиофилизации дала наилучшие результаты также с микоризными корнями V. myrtillus и V. vitis-idaea (рис. 2A и 2B). Микроскопия в темном поле с высокой интенсивностью света (рис. 3А) обеспечила превосходную визуализацию клеток корней по сравнению с традиционной микроскопией в светлом поле (рис. 3В).
Рис.1
(A) Корни C. vulgaris после обработки KOH и окрашивания трипановым синим, что привело к полной потере клеток коры корня. (B) Свежие корни C. vulgaris после окрашивания трипановым синим в течение 10 минут при комнатной температуре и проявления внутриклеточного спирализации гиф (HC). (С) Микоризный корней C. vulgaris после замораживания при –20 °C и окрашивания трипановым синим с выявлением внутриклеточного спирализации гиф (HC). Бар = 50 мк м.
Рис. 2
(A) Корни микоризы V. myrtillus после замораживания при –20 °C и окрашивания трипановым синим с обнаружением внутриклеточного спирализации гиф (HC).
(B) Корни микоризы V. vitis-idaea после замораживания при –20 °C и окрашивания трипановым синим и выявления внутриклеточного спирализации гиф (HC). Бар = 50 мк м.
Рис.3
(A) C. vulgaris корни микоризы, визуализированные с помощью темнопольной микроскопии с высокой интенсивностью света. (B) Сравнительная визуализация тех же корней микоризы C. vulgaris с использованием светлопольной микроскопии. Бар = 50 мк м.
4Обсуждение
Комбинированные методы окрашивания и микроскопии, описанные здесь, обеспечивают хорошую визуальную четкость и обнаружение колонизации эрикоидной микоризой в корнях, замороженных для последующего анализа, с дополнительными преимуществами простоты, быстрого применения и низкой стоимости. С практикой приготовление предметного стекла окрашенных корней эрикоидной микоризы занимает менее одного часа, а время микроскопии сокращается, поскольку метод темного поля с высокой интенсивностью света облегчает наблюдение микоризных структур в нескольких фокусных плоскостях.
Во-первых, окрашивание микоризных гиф было успешным после замораживания эрикоидных микоризных корней при -20 °С, при сохранении тонких гиф на поверхности корней и внутренних структурах гиф. Традиционные методы описывают очистку корней в KOH с последующей нейтрализацией и окрашиванием HCl, что, как было показано в нашем случае, повреждает тонкие эрикоидные корни растений и любые гифы на них или внутри них. Поскольку микроскопия, используемая в этом методе, обеспечивала повышенную четкость зрения и освещенность, можно было наблюдать микоризацию даже в темных клетках коры корня. Следовательно, этап очистки с использованием KOH был совершенно ненужным, и хрупкие структуры гиф были сохранены.
По сравнению с более совершенными и потенциально дорогостоящими методами визуализации, такими как дифференциально-интерференционный контраст (ДИК) или электронная микроскопия, высококачественная микроскопия микоризы с использованием микроскопии в темном поле имеет преимущества. Этот метод требует минимальной подготовки и достижим на большинстве современных световых микроскопов без дорогостоящего дополнительного оборудования.
Возможность четко наблюдать микоризные структуры уменьшает неопределенность при идентификации микоризной колонизации и обеспечивает более точную оценку частоты колонизации.
Основным преимуществом этого метода является короткое время применения, а также быстрое окрашивание и простая микроскопия, обеспечивающие возможность анализа большого количества образцов, которые также можно сохранить путем замораживания при –20 °C, что позволяет проводить дальнейшие молекулярные и химические анализы. Сокращение времени анализа при коммерческом производстве ягод или экологических исследований в полевых масштабах имеет решающее значение для получения результатов. Возможности этого метода могут становиться все более актуальными с растущим интересом к использованию эрикоидной микоризы в коммерческих целях, а также с текущими исследованиями, которые указывают на потенциальную важность эрикоидной микоризы в глобальном поглощении углерода. Представленный метод обеспечивает успешное окрашивание и микроскопию замороженных образцов корней эрикоидной микоризы.
Таким образом, хранящиеся в морозильнике образцы эрикоидных корней из старых завершенных экспериментов могут быть повторно проанализированы для количественной оценки колонизации эрикоидной микоризой.
Конфликт интересов
У авторов нет конфликта интересов, о котором необходимо сообщить.
Благодарности
Авторы благодарят Академию Финляндии за поддержку этой работы (номера грантов 292699, 293365).
Ссылки
[1] | Аверилл С. , Тернер Б.Л. , Финци А.С. . Опосредованная микоризой конкуренция между растениями и редуцентами способствует накоплению углерода в почве. Природа. (2014); 505: (7484): 543–5. |
[2] | Кэрни Дж.В. , Мехарг А.А. . Эрикоидная микориза: партнерство, использующее суровые эдафические условия. Европейский журнал почвоведения. (2003); 54: (4): 735–40. |
[3] | Колер А.
,
Куо А.
,
Надя Л.Г.
,
Морин Э. |
[4] | Корон Д. , Гогала Н. . Использование микоризных грибов при выращивании растений голубики ( Vaccinium corymbosum L.). Acta Horticulturae. (2000); 525: 101–6. |
[5] | Коске Р.Э. , Джемма Дж.Н. . Модифицированная процедура окрашивания корней для выявления микоризы VA. Микологические исследования. (1989); 92: (4): 486–8. |
[6] | МакГонигл Т.П. , Миллер М.Х. , Эванс Д.Г. , Фэирчайлд Г.Л. , Лебедь Дж.А. . Новый метод, дающий объективную меру колонизации корней везикулярно-арбускулярными микоризными грибами. Новый фитолог. (1990); 115: (3): 495–501. |
[7] | Нестби Р.
,
Крогстад Т. |
[8] | Филлипс Дж.М. , Хейман Д.С. . Усовершенствованные процедуры очистки корней и окрашивания паразитарных и везикулярно-арбускулярных микоризных грибов для быстрой оценки инфекции. Труды Британского микологического общества. (1970); 55: (1): 158-IN18. |
[9] | Продорутти Д. , Перто И. , Жионго Л. , Гесслер С. . Голубика высокорослая: выращивание, защита, селекция и биотехнология. Европейский журнал растениеводства и биотехнологии. (2007); 1: (1): 44–56. |
[10] | Садовский Дж.Дж.
,
Хэнсон Э.Дж.
,
Шильдер А.М.
. Колонизация корней эрикоидной микоризой и темными септированными эндофитами на органических и обычных полях черники в Мичигане. Международный журнал фруктовой науки.  |
,
Барри К.В.
,
Бускот Ф.
,
Канбек Б.
,
Чой С.
,
Цихоцкий Н.
,
Клум А.
,
Колперт Дж.
. Конвергентные потери механизмов распада и быстрый оборот генов симбиоза у микоризных мутуалистов. Генетика природы. (2015); 47: (4): 410–5.
,
Джонер Э.
,
Воник М.
. Влияние удобрения NP на развитие голубики европейской (Vaccinium myrtillus L.) на возделываемых землях в центральной части Норвегии. Журнал исследований ягод. (2014); 4: (3): 147–57.